B-LCL-HROC69

B-LCL-HROC69 е имунизирана с вируса на Епщайн-Бар (EBV) B-лимфобластоидна клетъчна линия, създадена от тумор-инфилтриращи B-клетки (TiBc), изолирани от първична проба от колоректален карцином, обозначена като HROC69. Родителският тумор произхожда от възрастен мъж с десен колоректален карцином от конвенционален спорадичен тип и напреднал стадий на заболяването. В-клетките са изолирани от прясно резецирана туморна тъкан и иммортализирани ex vivo, като се използва супернатант от EBV-продуциращата B95/8 мармозетна клетъчна линия в присъствието на циклоспорин А за потискане на растежа на Т- и NK-клетки. Разрастването на EBV-трансформираните клони на В-клетки обикновено се е случвало в рамките на няколко седмици, а клоналността е била потвърдена чрез анализ на пренареждането на гените на тежките и леките вериги на имуноглобулина, като се използват мултиплексни PCR протоколи BIOMED-2.

B-LCL-HROC69 секретира имуноглобулин А (IgA), както е определено чрез изотип-специфичен ELISA на супернатанти от дългосрочна култура. За разлика от няколко паралелно установени линии TiBc, произвеждащи IgG, IgA, получен от HROC69, не беше допълнително характеризиран за свързване с туморни клетки в първоначалните функционални скрининг тестове. Важно е да се отбележи, че не е настъпило спонтанно разрастване на B-клетъчните култури при отсъствие на екзогенен EBV, което показва, че иммортализацията е in vitro събитие, а не последица от латентна EBV инфекция in vivo. Следователно B-LCL-HROC69 представлява моноклонален, антигенно-опитен модел на тумор-инфилтриращи В-клетки, подходящ за изследване на хуморалните имунни реакции в микросредата на колоректалния карцином и за потенциалното идентифициране на тумор-асоциирани антигени, разпознавани от локално разширени клони на В-клетки.

37°C, 5%_CO2, овлажнена атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

Ние в Cytion заставаме зад качеството и жизнеспособността на нашите продукти. Гарантираме, че нашите клетки ще бъдат жизнеспособни в началото на култивирането в продължение на 60 дни след изпращането им от нашите съоръжения. Гарантираме, че всички материали отговарят на спецификациите, описани в сертификата за анализ и/или продуктовата листа

За пълни подробности, моля, направете справка с нашата <a href=""/Кои сме ние/Гаранция/"" hreflang=""x-default"">Гаранционна декларация