B-LCL-HROC69

Το B-LCL-HROC69 είναι μια αθανατοποιημένη με τον ιό Epstein-Barr (EBV) σειρά κυττάρων Β λεμφοβλαστών που δημιουργήθηκε από κύτταρα Β που διεισδύουν σε όγκους (TiBc) που απομονώθηκαν από ένα δείγμα πρωτογενούς καρκίνου του παχέος εντέρου με την ονομασία HROC69. Ο γονικός όγκος προήλθε από έναν ενήλικα άνδρα ασθενή με καρκίνο του παχέος εντέρου στη δεξιά πλευρά, συμβατικού σποραδικού τύπου και σε προχωρημένο στάδιο. Τα Β κύτταρα απομονώθηκαν από πρόσφατα εκτομισθέντα καρκινικό ιστό και αθανατοποιήθηκαν ex vivo χρησιμοποιώντας τον υπερκείμενο από την κυτταρική σειρά B95/8 μαρμοζέτων που παράγει EBV, παρουσία κυκλοσπορίνης Α για την καταστολή της ανάπτυξης των Τ και ΝΚ κυττάρων. Η ανάπτυξη κλώνων Β-κυττάρων που μετασχηματίστηκαν από τον EBV συνέβη συνήθως εντός αρκετών εβδομάδων και η κλωνικότητα επιβεβαιώθηκε με ανάλυση αναδιάταξης γονιδίων βαρέων και ελαφρών αλυσίδων ανοσοσφαιρίνης χρησιμοποιώντας πρωτόκολλα BIOMED-2 multiplex PCR.

Το B-LCL-HROC69 εκκρίνει ανοσοσφαιρίνη Α (IgA), όπως προσδιορίστηκε με ELISA ειδικό για τον ισοτύπο των υπερκειμένων μακροχρόνιας καλλιέργειας. Σε αντίθεση με αρκετές σειρές TiBc που παράγουν IgG και που δημιουργήθηκαν παράλληλα, η IgA που προέρχεται από το HROC69 δεν χαρακτηρίστηκε περαιτέρω για τη σύνδεση με καρκινικά κύτταρα στις αρχικές δοκιμές λειτουργικού ελέγχου. Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι δεν παρατηρήθηκε αυθόρμητη ανάπτυξη καλλιεργειών Β-κυττάρων απουσία εξωγενούς EBV, υποδηλώνοντας ότι η αθανατοποίηση είναι ένα in vitro φαινόμενο και όχι συνέπεια λανθάνουσας λοίμωξης από EBV in vivo. Το B-LCL-HROC69 αντιπροσωπεύει επομένως ένα μονοκλωνικό, αντιγονικά έμπειρο μοντέλο Β-κυττάρων που διεισδύουν σε όγκους, κατάλληλο για τη διερεύνηση των χυμικών ανοσολογικών αποκρίσεων στο μικροπεριβάλλον του καρκίνου του παχέος εντέρου και για την πιθανή ταυτοποίηση των αντιγόνων που σχετίζονται με τον όγκο και αναγνωρίζονται από τοπικά επεκταθέντες κλώνους Β-κυττάρων.

37°C, 5%_CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

Στην Cytion, υποστηρίζουμε την ποιότητα και τη βιωσιμότητα των προϊόντων μας. Εγγυόμαστε ότι τα κύτταρά μας θα είναι βιώσιμα κατά την έναρξη της καλλιέργειας για 60 ημέρες μετά την αποστολή από τις εγκαταστάσεις μας. Διαβεβαιώνουμε ότι όλα τα υλικά συμμορφώνονται με τις προδιαγραφές που περιγράφονται στο Πιστοποιητικό Ανάλυσης ή/και στο Φύλλο Προϊόντος

Για πλήρεις λεπτομέρειες, ανατρέξτε στην <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Δήλωση εγγύησης