B-LCL-HROC69

B-LCL-HROC69 è una linea cellulare linfoblastoide B immortalizzata dal virus di Epstein-Barr (EBV) ottenuta da cellule B infiltranti il tumore (TiBc) isolate da un campione di carcinoma colorettale primario denominato HROC69. Il tumore parentale proveniva da un paziente maschio adulto affetto da carcinoma colorettale destro di tipo sporadico convenzionale in stadio avanzato. Le cellule B sono state isolate dal tessuto tumorale appena asportato e immortalizzate ex vivo utilizzando il supernatante della linea cellulare B95/8 di marmoset produttrice di EBV in presenza di ciclosporina A per sopprimere la crescita delle cellule T e NK. La crescita dei cloni di cellule B trasformate dall'EBV si è verificata tipicamente entro alcune settimane e la clonalità è stata confermata dall'analisi del riarrangiamento dei geni delle catene pesanti e leggere delle immunoglobuline utilizzando protocolli PCR multiplex BIOMED-2.

B-LCL-HROC69 secerne immunoglobulina A (IgA), come determinato dall'ELISA specifico per isotipo dei supernatanti di coltura a lungo termine. A differenza di diverse linee TiBc produttrici di IgG stabilite in parallelo, l'IgA derivata da HROC69 non è stata ulteriormente caratterizzata per il legame con le cellule tumorali nei test di screening funzionale iniziali. È importante sottolineare che non si è verificata alcuna crescita spontanea delle colture di cellule B in assenza di EBV esogeno, indicando che l'immortalizzazione è un evento in vitro piuttosto che la conseguenza di un'infezione latente da EBV in vivo. B-LCL-HROC69 rappresenta quindi un modello monoclonale di cellule B infiltranti il tumore con esperienza antigenica, adatto per lo studio delle risposte immunitarie umorali all'interno del microambiente del carcinoma colorettale e per la potenziale identificazione di antigeni associati al tumore riconosciuti da cloni di cellule B espansi localmente.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia