B-LCL-HROC69

B-LCL-HROC69 on Epstein-Barr viiruse (EBV) abil immortaliseeritud B-lümfoblastoidne rakuliin, mis on loodud primaarse kolorektaalse kartsinoomi proovist HROC69 isoleeritud tuumorisse infiltreerunud B-rakkudest (TiBc). Emarakk pärines täiskasvanud meespatsiendilt, kellel oli tavapärase sporadilise tüübi parempoolne kolorektaalne kartsinoom ja haigus oli edasijõudnud staadiumis. B-rakud isoleeriti värskelt resekteeritud kasvajakoest ja immortaliseeriti ex vivo, kasutades EBV-d tootva B95/8 marmoseti rakuliini supernatanti tsüklosporiini A juuresolekul, et pärssida T- ja NK-rakkude kasvu. EBV-transformeeritud B-rakkude kloonide kasv toimus tavaliselt mõne nädala jooksul ja kloonaalsus kinnitati immunoglobuliini raske- ja kerge ahela geeni ümberkorralduse analüüsiga, kasutades BIOMED-2 multiplex PCR protokolle.

B-LCL-HROC69 eritab immunoglobuliini A (IgA), mis määrati kindlaks pikaajalise kultuuri supernatantide isotüübi-spetsiifilise ELISA abil. Erinevalt mitmest paralleelselt loodud IgG-d tootvast TiBc liinist, ei iseloomustatud HROC69-st saadud IgA-d esialgsetes funktsionaalsetes sõelumiskatsetes edasi kasvajarakkude sidumise osas. Oluline on, et B-rakkude kultuurides ei esinenud spontaanset väljakasvu eksogeense EBV puudumisel, mis näitab, et immortaliseerumine on pigem in vitro nähtus kui latentsest EBV infektsioonist in vivo tulenev tagajärg. B-LCL-HROC69 esindab seega monoklonaalset, antigeeniga kokku puutunud kasvajasse imbunud B-rakkude mudelit, mis sobib humoraalse immuunvastuse uurimiseks kolorektaalse kartsinoomi mikrokeskkonnas ja kohalikult laienenud B-rakkude kloonide poolt tunnustatud kasvajaga seotud antigeenide potentsiaalseks identifitseerimiseks.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest