B-LCL-HROC69

B-LCL-HROC69 är en Epstein-Barr-virus (EBV)-immortaliserad B-lymfoblastoidcellinje som etablerats från tumörinfiltrerande B-celler (TiBc) isolerade från ett primärt kolorektalt karcinomprov betecknat HROC69. Den ursprungliga tumören härstammar från en vuxen manlig patient med höger-sidig kolorektal karcinom av konventionell sporadisk typ och avancerad sjukdom. B-celler isolerades från nyligen resekterad tumörvävnad och odödliggjordes ex vivo med hjälp av supernatant från den EBV-producerande B95/8-marmosetcellinjen i närvaro av cyklosporin A för att undertrycka T- och NK-cellernas tillväxt. Utväxt av EBV-transformerade B-cellkloner inträffade vanligtvis inom några veckor, och klonaliteten bekräftades genom analys av omarrangemang av immunoglobulinets tunga och lätta kedjor med hjälp av BIOMED-2 multiplex PCR-protokoll.

B-LCL-HROC69 utsöndrar immunoglobulin A (IgA), vilket fastställts genom isotypspecifik ELISA av långvariga odlingssupernatant. Till skillnad från flera IgG-producerande TiBc-linjer som etablerats parallellt, karakteriserades IgA från HROC69 inte ytterligare för tumörcellbindning i de initiala funktionella screeningtesterna. Det är viktigt att notera att ingen spontan utväxt av B-cellskulturer inträffade i frånvaro av exogent EBV, vilket indikerar att immortaliseringen är en in vitro-händelse snarare än en följd av latent EBV-infektion in vivo. B-LCL-HROC69 representerar därför en monoklonal, antigenerfaren tumörinfiltrerande B-cellsmodell som är lämplig för att undersöka humorala immunsvar inom mikro-miljön för kolorektal cancer och för potentiell identifiering av tumörassocierade antigener som känns igen av lokalt expanderade B-cellkloner.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring