B-LCL-HROC69

B-LCL-HROC69 ir Epšteina-Barra vīrusa (EBV) imortalizēta B limfoblastoīdu šūnu līnija, kas izveidota no audzēja infiltrējošām B šūnām (TiBc), kas izdalītas no primārā kolorektālā karcinoma parauga ar nosaukumu HROC69. Mātes audzējs cēlies no pieaugušā vīrieša pacienta ar labās puses kolorektālo karcinomu, kas ir parasts sporādisks tips un atrodas progresējošā stadijā. B šūnas tika izdalītas no svaigi izgriezta audzēja audiem un imortalizētas ex vivo, izmantojot EBV ražojošās B95/8 marmoset šūnu līnijas supernatantu ciklosporīna A klātbūtnē, lai nomāktu T un NK šūnu izaugšanu. EBV transformētu B šūnu klonu izaugsme parasti notika vairāku nedēļu laikā, un klonalitāte tika apstiprināta ar imūnglobulīna smagās un vieglas ķēdes gēnu pārkārtojuma analīzi, izmantojot BIOMED-2 multipleksa PCR protokolus.

B-LCL-HROC69 izdalīja imūnglobulīnu A (IgA), kā noteikts ar izotipa specifisku ELISA ilgtermiņa kultūras supernatantu analīzi. Pretstatā vairākām paralēli izveidotām IgG ražojošām TiBc līnijām, IgA, kas iegūts no HROC69, sākotnējās funkcionālās skrīninga analīzēs netika turpmāk raksturots attiecībā uz audzēja šūnu saistīšanos. Svarīgi, ka bez eksogēna EBV nebija novērota spontāna B šūnu kultūru izaugsme, kas liecina, ka imortalizācija ir in vitro process, nevis latentas EBV infekcijas in vivo sekas. Tādējādi B-LCL-HROC69 ir monoklonāls, antigēnu pieredzējis audzēju infiltrējošs B šūnu modelis, kas piemērots humoro imūnreakciju izpētei kolorektālā karcinoma mikroapvidū un potenciālai audzēju saistītu antigēnu identifikācijai, kurus atpazīst lokāli izplatīti B šūnu kloni.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu