B-LCL-HROC69

B-LCL-HROC69 هو خط خلايا ليمفاوية B مخلدة بفيروس إبشتاين-بار (EBV) تم إنشاؤه من خلايا B المتسللة إلى الورم (TiBc) المعزولة من عينة سرطان القولون والمستقيم الأولي المسمى HROC69. نشأ الورم الأصلي من مريض بالغ مصاب بسرطان القولون والمستقيم من النوع المتقطع التقليدي في الجانب الأيمن وفي مرحلة متقدمة من المرض. تم عزل الخلايا B من أنسجة الورم المقطوعة حديثًا وتم تحويلها إلى خلايا خالدة خارج الجسم الحي باستخدام الطبقة العائمة من خط الخلايا B95/8 المارموسيت المنتجة لفيروس إبشتاين-بار (EBV) في وجود سيكلوسبورين A لقمع نمو الخلايا T و NK. حدث نمو مستنسخات الخلايا البائية المحولة بفيروس EBV عادةً في غضون عدة أسابيع، وتم تأكيد الاستنساخ من خلال تحليل إعادة ترتيب جينات السلسلة الثقيلة والخفيفة للغلوبولين المناعي باستخدام بروتوكولات BIOMED-2 multiplex PCR.

تفرز B-LCL-HROC69 الغلوبولين المناعي A (IgA)، كما تم تحديده بواسطة ELISA الخاص بالنمط النوعي لمخلفات الثقافة طويلة الأمد. على عكس العديد من سلالات TiBc المنتجة لـ IgG التي تم إنشاؤها بالتوازي، لم يتم توصيف IgA المشتق من HROC69 بشكل أكبر لارتباط الخلايا السرطانية في اختبارات الفحص الوظيفي الأولية. والأهم من ذلك، لم يحدث أي نمو تلقائي لثقافات الخلايا البائية في غياب فيروس EBV الخارجي، مما يشير إلى أن الخلود هو حدث في المختبر وليس نتيجة لعدوى EBV الكامنة في الجسم الحي. وبالتالي، يمثل B-LCL-HROC69 نموذجًا أحادي النسيلة من الخلايا البائية المخترقة للأورام والمتمرسة في مسببات الأمراض المناعية، وهو مناسب لدراسة الاستجابات المناعية الخلطية داخل البيئة الدقيقة لسرطان القولون والمستقيم وللتعرف المحتمل على مسببات الأمراض المرتبطة بالأورام التي تتعرف عليها نسخ الخلايا البائية الموسعة محليًا.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان