B-LCL-HROC69

B-LCL-HROC69 es una línea celular linfoblastoide B inmortalizada por el virus de Epstein-Barr (VEB), establecida a partir de células B infiltrantes de tumor (TiBc) aisladas de una muestra de carcinoma colorrectal primario denominada HROC69. El tumor original procedía de un paciente adulto del sexo masculino con carcinoma colorrectal del lado derecho, de tipo esporádico convencional y en etapa avanzada. Las células B se aislaron del tejido tumoral recién resecado y se inmortalizaron ex vivo utilizando el sobrenadante de la línea celular de marmoseta B95/8 productora de VEB, en presencia de ciclosporina A para suprimir el crecimiento de las células T y NK. El crecimiento de los clones de células B transformadas por el VEB se produjo típicamente en el plazo de varias semanas, y la clonalidad se confirmó mediante el análisis de la reorganización de los genes de las cadenas pesadas y ligeras de la inmunoglobulina utilizando protocolos de PCR multiplex BIOMED-2.

La línea B-LCL-HROC69 secreta inmunoglobulina A (IgA), según se determinó mediante ELISA específico de isotipo de los sobrenadantes de cultivos a largo plazo. A diferencia de varias líneas de TiBc productoras de IgG establecidas en paralelo, la IgA derivada de HROC69 no se caracterizó más a fondo en cuanto a su unión a células tumorales en los ensayos iniciales de cribado funcional. Es importante destacar que no se produjo ningún crecimiento espontáneo de los cultivos de células B en ausencia de VEB exógeno, lo que indica que la inmortalización es un evento in vitro y no la consecuencia de una infección latente por el VEB in vivo. Por lo tanto, B-LCL-HROC69 representa un modelo de células B infiltrantes tumorales monoclonales y expuestas a antígenos, adecuado para investigar las respuestas inmunitarias humorales dentro del microambiente del carcinoma colorrectal y para la posible identificación de antígenos asociados al tumor reconocidos por clones de células B expandidos localmente.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.