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HROC103 T0 M1
Gewebe
Kolorektal, hergestellt aus einem PDx (patient-derived xenograft) von CRC-Primärgewebe (Colon ascendens, TNM-Stadium T2N1M0R0L0V0, Grad G2, Lk(n) + 2, ∑ Lk(n) 23).
Krankheit
Adenokarzinom
Metastasenherd
Beteiligung regionaler Lymphknoten (TNM N1; Lk(n)+2 von 23 untersuchten); keine Fernmetastasen (M0)
Synonyme
HROC103

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HROC103 T0 M1

Cell line · Artikelnummer 300802

This is one of a series of cell lines which have been established by PD Dr. Michael Linnebacher from a PDTx (Patient-derived Tumor xenograft) since 2006.

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung
Sie gehört zu einer Reihe von Zelllinien, die seit 2006 von PD Dr. Michael Linnebacher aus einem PDTx (Patient-derived Tumor xenograft) etabliert wurden.
Gewebe
Kolorektal, hergestellt aus einem PDx (patient-derived xenograft) von CRC-Primärgewebe (Colon ascendens, TNM-Stadium T2N1M0R0L0V0, Grad G2, Lk(n) + 2, ∑ Lk(n) 23).
Krankheit
Adenokarzinom
Metastasenherd
Beteiligung regionaler Lymphknoten (TNM N1; Lk(n)+2 von 23 untersuchten); keine Fernmetastasen (M0)
Anwendungen
Forschung zu Darmkrebs; Biologie des kolorektalen Karzinoms; Forschung an aus PDx-Daten abgeleiteten Zelllinien; Bewertung der Arzneimittelempfindlichkeit und gezielter Therapien; Modellierung von p53/KRAS-mutiertem kolorektalem Karzinom; Immunologie des MSS-kolorektalen Karzinoms; HROC-Biobank-Studien mit patientenspezifischen Proben
Synonyme
  • HROC103

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
Ohne Gentechnik
Angaben zum GVO-Status
No genetic modification; wildtype patient-derived CRC cell line established from a patient-derived xenograft by PD Dr. Linnebacher
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Kleine Zellen in Kolonien
Zelltyp
Epithelial
Ploidie-Status
Aneuploid
MSI-Status
MSS
Verdopplungszeit
30 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
HROC103 T0 M1 (Cytion Katalognummer 300802)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_1D10

05Expression und Anfälligkeit

Mutationsprofil
P53 mut, APC mut, K-RasG12VA, N-Raswt, H-Raswt, PIK3CAwt, B-Rafwt

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L Glucose, w: 2,5 mM L-Glutamin, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM Natriumpyruvat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820400a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Split-Verhältnis
1 bis 3
Aussaatdichte
2 x 104 Zellen/cm²
Flüssigkeitswechsel
Alle 3 bis 5 Tage
Erholung nach dem Auftauen
Wenige Tage
Auftauen und Kultivierung

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
44 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Kaukasisch