Pāriet uz saturu
Hep-56.1C
Audums
Aknas
Slimība
Hepatocelulārā karcinoma
Sinonīmi
HEP-56.1C, 56.1C, 56.1c

Dokumenti

Hep-56.1C

Cell line · Preces numurs 400203

The Hep-56.1c hepatoma cell line is derived from a mouse liver tumor, specifically from the C57BL/6J mouse strain. This cell line is characterized by a no...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Neliels krājums
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

Hep-56.1c hepatomas šūnu līnija ir iegūta no peļu aknu audzēja, konkrēti no C57BL/6J peļu celma. Šai šūnu līnijai ir raksturīga ievērojama mutācija p53 gēnā, kas konstatēta dažādos in vitro pavairošanas posmos. Konkrēti, Hep-56.1c piemīt C:G uz G:C transversija 5. eksona 132. kodonā, kā rezultātā aminoskābe mainās no cisteīna uz triptofānu. Šī mutācija tika konstatēta 17. pārejā, kas liecina par mutācijas radītu selektīvu augšanas priekšrocību, kas noved pie tās dominances šūnu populācijā.

Hep-56.1c šūnu līnijai ir pārsvarā epitēlija morfoloģija, kas atspoguļo tās hepatocītisko izcelsmi. Tas atbilst tās starpfilamentu olbaltumvielu profilam, kas ietver vienkāršos keratīnus K8 un K18, kā arī vimentīnu un keratīnu K19 dažādās pakāpēs. Šo proteīnu klātbūtne apstiprina šūnu līnijas hepatocītisko raksturu un tās klasificēšanu kā hepatomas līniju.

Turpmākā Hep-56.1c analīze, izmantojot DNS pirkstu nospiedumu noteikšanu, neatklāja nekādas būtiskas strukturālas anomālijas, lai gan, palielinoties pasāžu skaitam, tika novērotas dažas izmaiņas konkrētu joslu relatīvajā intensitātē. Tas norāda uz genoma stabilitāti ar zināmu mainīguma pakāpi ilgāku kultivēšanas periodu laikā. P53 mutāciju analīze un starpfilamentu proteīnu ekspresijas modeļi kopā veido Hep-56.1c kā vērtīgu modeli hepatocelulārās karcinomas un p53 mutāciju lomas aknu audzēju veidošanās procesā izpētei.

Audums
Aknas
Slimība
Hepatocelulārā karcinoma
Sinonīmi
  • HEP-56.1C
  • 56.1C
  • 56.1c

02Klasifikācija

Organisms
Pele
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgs

04Identifikatori

Atsauce
Hep-56.1C (Cytion kataloga numurs 400203)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
10090
Cellosaurus
CVCL_5768

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM, w: 4,5 g/l glikozes, w: 4 mM L-glutamīna, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM nātrija piruvāta (Cytion izstrādājuma numurs 820300a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
1 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
Ik pēc 3 līdz 5 dienām
Atgūšanās pēc atkusņa
Pēc atkausēšanas izkliedējiet šūnas uz šķīvja ar blīvumu 5 x 104 šūnas/cm2 un ļaujiet šūnām atgūties no sasaldēšanas procesa un pielipt vismaz 24 stundas.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Ziedotājs

Šķirne / pasuga
C57BL/6J
Donora vecums
Pieaugušo