Células Vero: Abrindo caminhos na investigação viral e na inovação em vacinas

A linha celular Vero, um modelo de células mamíferas imortalizadas derivadas das células epiteliais renais do macaco verde africano, está na vanguarda da investigação em virologia, microbiologia e biologia celular e molecular. A sua ampla aplicação abrange o desenvolvimento de vacinas, ensaios farmacêuticos e a exploração da biologia de vírus e parasitas, a imunologia tumoral e as estratégias imunoterapêuticas.

Origem e características principais das células Vero

A investigação de uma linha celular como a Vero suscita várias questões: O que são, exatamente, as células Vero? Como foi estabelecida a linha celular Vero? Qual é a história por trás do nome «Vero»? Esta secção tem como objetivo esclarecer a génese e as principais características das células Vero.

A origem da linha celular Vero remonta a 1962, tendo surgido a partir de células epiteliais renais do macaco verde africano. Esta linha foi cultivada por Y. Kawakita e Yasumura na Universidade de Chiba, no Japão. O termo «Vero» deriva de «Verda reno» em esperanto, que se traduz por «rim verde», embora «Vero» também evoque a noção de «verdade».

As células Vero formam tipicamente monocamadas, mas podem adaptar-se a culturas em suspensão, apresentando uma estrutura de tipo epitelial. Estas células caracterizam-se pela sua forma arredondada a alongada e por um diâmetro médio de cerca de 17 µm. Notavelmente, as células Vero apresentam uma contagem cromossómica hipodiplóide, sendo o número modal de cromossomas 58 em cerca de 66% da população celular, embora existam variações com ploidias mais elevadas numa pequena fração (1,7%) das células.

Clones de células Vero e as suas propriedades únicas

Clones distintos derivados da linhagem de células Vero apresentam características únicas que os distinguem da linhagem original. Entre estes, dois clones notáveis de células Vero são:

• Linha celular Vero E6: Também conhecida como Vero C1008, este clone tem origem nas células Vero 76 e foi isolado em 1979 por P.J. Price, utilizando uma técnica de diluição em placas de microtitulação. As células Vero E6 são particularmente adequadas para o cultivo de vírus que se replicam lentamente.

• Células Vero 76: Originárias do rim de um macaco verde africano em 1968, estas células mantêm a morfologia epitelial característica das células Vero.

Estas variantes das células Vero, a par da linha parental, continuam a ser fundamentais para o avanço da investigação virológica e o desenvolvimento de intervenções médicas, o que sublinha a sua importância na comunidade científica.

Tecido renal humano ao microscópio.

Informações sobre a cultura

A cultura de células Vero, uma linha celular de macaco, requer familiaridade com parâmetros específicos, tais como o tempo de duplicação, a densidade de sementeira e o meio de crescimento adequado.

• Tempo de duplicação da população: O tempo de duplicação das células Vero é de cerca de 24 horas.

• Adesão: As células Vero aderem às superfícies e, normalmente, formam monocamadas quando cultivadas.

• Densidade de sementeira: É aconselhável começar com uma densidade de sementeira de 1 x 10^4 células/cm^2. Para cultivar células Vero aderentes, lave-as com PBS e trate-as com Accutase para as descolar. Após a desadesão, centrifugue as células, ressuspende-as em meio fresco e transfira-as para novos frascos de cultura.

• Meio de crescimento: Tanto o Ham’s F12 como o DMEM são meios adequados para o cultivo de células Vero. Estes devem ser suplementados com 2,5 mM de L-glutamina e 5% de soro fetal bovino (FBS) para promover um crescimento ideal. O meio deve ser renovado duas a três vezes por semana.

• Condições de crescimento: As células Vero prosperam a uma temperatura de 37 °C numa atmosfera humidificada com 5% de CO₂.

• Armazenamento: Para armazenamento a longo prazo, as células Vero devem ser mantidas a temperaturas inferiores a -150 °C, quer num congelador de temperatura ultrabaixa, quer na fase de vapor de azoto líquido.

• Processo de congelação e meio: Para criopreservação, utilize CM-1 ou CM-ACF, ou o meio de crescimento com FBS e DMSO, como meio de congelação. Recorra a uma técnica de congelação lenta, diminuindo a temperatura gradualmente a 1 °C por minuto.

• Processo de descongelação: Descongele as células Vero mergulhando o recipiente num banho-maria a 37 °C e agitando-o suavemente durante 40 a 60 segundos. Em seguida, dilua as células em meio fresco, centrifugue para remover o crioprotetor, ressuspenda em meio de crescimento fresco e coloque-as num novo frasco para recuperação e crescimento.

• Nível de biossegurança: As células Vero devem ser manuseadas num laboratório que cumpra os requisitos do nível de biossegurança 1.

Células Vero dois e um dia após a subcultura (ampliação de 10x).

Aplicações da linha celular Vero na investigação

A linha celular Vero tem inúmeras aplicações na investigação nos domínios da biologia celular e da virologia. Aqui, abordámos algumas delas em particular.

Células Vero na investigação viral e na produção de vacinas

As células Vero, derivadas de células renais do macaco verde africano, tornaram-se um elemento essencial no desenvolvimento de bioprocessos para a produção de vacinas contra vários vírus, incluindo o poliovírus e o vírus da encefalite japonesa. A sua adaptabilidade tanto em culturas aderentes como em suspensão e a sua ampla capacidade de suporte a vírus, incluindo para agentes patogénicos como o vírus dos pequenos ruminantes, destacam a sua importância no isolamento de vírus e no desenvolvimento de vacinas.

Inúmeros estudos têm utilizado células Vero para a produção de vacinas humanas. Por exemplo, um estudo notável publicado em 2019 demonstrou a utilização de células Vero no desenvolvimento de uma vacina inativada contra o vírus da febre amarela [2].

As células Vero são frequentemente utilizadas em estudos de infeção viral, como um estudo realizado em 2020 que infetou células Vero com diferentes isolados do vírus SARS-CoV-2 para estudar as propriedades de crescimento do vírus [4]. Da mesma forma, outro estudo investigou as respostas celulares à infeção por SARS-CoV-2 utilizando cultura de células Vero [5].

O papel das células Vero na engenharia de tecidos e no desenvolvimento de bioprocessos a montante

Para além da produção de vacinas, as células Vero contribuem para a engenharia de tecidos e para o campo mais vasto do desenvolvimento de bioprocessos, sublinhando a necessidade de investigação contínua sobre as suas propriedades e aplicações. A seleção de sublinhagens adequadas de células Vero é fundamental para maximizar o seu potencial nas indústrias biotecnológica e farmacêutica.

Aplicação das células Vero em testes de eficácia e segurança de medicamentos

As células Vero são frequentemente utilizadas em ensaios de medicamentos para avaliar a eficácia e a segurança de compostos farmacêuticos. Estas células são frequentemente consideradas um modelo padrão para células renais normais em estudos que investigam os efeitos citotóxicos de vários medicamentos e agentes terapêuticos. Por exemplo, uma investigação que comparou o impacto dos extratos da raiz da planta Terminalia avicennioides tanto na HepG2, uma linha celular de cancro do fígado, como nas células Vero, derivadas do epitélio renal de macaco, concluiu que os extratos eram mais prejudiciais para as células cancerosas do que para as células normais.

Limitações das células Vero

Embora as células Vero sejam amplamente utilizadas, apresentam algumas limitações, tais como a produção de toxina Vero e alterações genómicas que podem afetar determinadas aplicações. Compreender as sublinhagens específicas e as características genómicas das células Vero, incluindo a linhagem Vero F6, é essencial para otimizar a sua utilização em vários bioprocessos.

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Publicações de investigação

Seguem-se algumas das publicações de investigação mais recentes e mais citadas que abordam as células Vero.

Adaptação das células Vero ao crescimento em suspensão para a produção do vírus da raiva em diferentes meios sem soro

Este estudo, publicado na revista Vaccine Journal (2019), adaptou as células Vero para crescerem em culturas em suspensão, com o objetivo de produzir o vírus da raiva em títulos elevados, utilizando vários meios sem soro.

Suscetibilidade do Toxoplasma gondii ao extrato etanólico de Tinospora crispa em células Vero

Este artigo foi publicado na revista «Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine» em 2019. O estudo sugeriu que o extrato etanólico da planta Tinospora crispa exerce um efeito prejudicial sobre o parasita Toxoplasma gondii. No entanto, é seguro para as células hospedeiras (a linha celular Vero).

Efeitos do extrato de folhas de Colchicum baytopiorum na citotoxicidade e nas vias de morte celular nas linhas celulares C-4 I e Vero

Este artigo foi publicado pelo «Journal of the Balkan Union of Oncology» em 2021. Neste estudo, Ozlem Dagdeviren Ozsoylemez e Gul Ozcan exploraram o efeito citotóxico do extrato de folhas de Colchicum baytopiorum nas linhas celulares C-4I e Vero.

O resveratrol inibe a replicação do coronavírus 2 da síndrome respiratória aguda grave (SARS-CoV-2) em células Vero em cultura

Este estudo, publicado na revista «Phytotherapy Research» (2021), utilizou células Vero infetadas com o SARS-CoV-2 para investigar o efeito terapêutico do resveratrol na replicação do vírus.

As estatinas lipofílicas inibem a produção do vírus Zika em células Vero

Este artigo publicado na revista *Nature Scientific Reports* (2019) propõe que as estatinas lipofílicas, ou seja, a cerivastatina, a lovastatina, a fuvastatina, a sinvastatina e a mevastatina, podem impedir a produção do vírus Zika em células Vero.

Recursos para células Vero: protocolos, vídeos e muito mais

• Transfecção de células Vero: esta ligação irá guiá-lo através de um protocolo de transfecção para células Vero.
• Transfecção da linha celular Vero: Este vídeo explica um protocolo de transfecção para a linha celular Vero.
• Subcultura de células Vero: Este vídeo descreve recomendações gerais de subcultura para linhas celulares aderentes.

Protocolos de cultura celular

• Cultura de células Vero: Este site contém um protocolo bem explicado para a cultura de células Vero.
• Cultura de células Vero: Este documento pode ajudá-lo a aprender o protocolo para a propagação, manutenção e congelação de células Vero.

Perguntas frequentes sobre as células Vero

Referências

1. Ammerman, N.C., M. Beier‐Sexton e A.F. Azad, «Crescimento e manutenção de linhas celulares Vero». Current protocols in microbiology, 2008. 11(1): p. A. 4E. 1–A. 4E. 7.
2. Pato, T.P., et al., Purificação do vírus da febre amarela produzido em células Vero para o fabrico de vacinas inativadas. Vaccine, 2019. 37(24): p. 3214–3220.
3. Aliyu-Amoo, H., et al., Efeito antiproliferativo de extratos e frações da raiz de Terminalia avicennioides (Combretaceae) Guill e Perr. nas linhas celulares HepG2 e Vero. Clinical Phytoscience, 2021, 7(1): p. 1–7.
4. Yao, P., et al., Isolamento e características de crescimento do SARS-CoV-2 em células Vero. Virologica Sinica, 2020. 35(3): p. 348–350.
5. Park, B.K., et al., Sinalização diferencial e produção de vírus em células Calu-3 e Vero após infeção pelo SARS-CoV-2. Biomolecules & Therapeutics, 2021. 29(3): p. 273.