A549-RFP

A549-RFP הוא נגזרת המסומנת בפלואורסצנט של קו התאים האנושי A549 של אדנוקרצינומה ריאתית, שהונדסה כך שתבטא באופן קבוע חלבון פלואורסצנטי אדום (RFP) לצורך הדמיה ומעקב בזמן אמת. קו התאים ההורי A549 הוקם מאדנוקרצינומה של הריאה שמקורה בתורם בוגר, והוא מציג מורפולוגיה אפיתלית עם מאפייני צמיחה דבקים. תאי A549 שומרים על תכונות של תאי אפיתל אלבולריים מסוג II, כולל ביטוי של ציטוקרטין ויכולת לייצר חלבונים הקשורים לסורפקטנט. הכנסת קלטת ביטוי RFP יציבה מאפשרת פלואורסצנציה רציפה מבלי לשנות באופן משמעותי את תכונות ההתפשטות והמטבוליזם הפנימיות של הקו ההורי, מה שהופך את A549-RFP למתאים למחקרי הדמיה ארוכי טווח.

אפיון תפקודי של תאי A549 במסגרת פאנלים נרחבים של תאי סרטן הראה כי גודל התא, תכולת החלבון וקצב סינתזת החלבון מתואמים באופן חיובי עם נפח התא, וכי תאים גדולים יותר נוטים להתרבות בקצב איטי יותר. בניתוחים השוואתיים, תאי A549 ממוקמים בקבוצת קווי תאי סרטן אפיתל קטנים יחסית, המתרבים במהירות רבה יותר, בניגוד לתאים גדולים יותר, הדומים יותר לתאים מזנכימליים, המציגים ביטוי גבוה יותר של וימנטין ורמות נמוכות יותר של E-cadherin. הבדלים מטבוליים ופנוטיפיים אלה רלוונטיים לפרשנות הניסויית, שכן קצב סינתזת החלבונים והזרימות המטבוליות משתנים בהתאם לגודל התא ומשפיעים על הרגישות לחומרים המכוונים להתרבות או למסלולים אנבוליים המווסתים על ידי mTOR. השינוי ל-RFP שומר על התאמתם של תאי A549 למחקרים מטבוליים ופרמקולוגיים מסוג זה, תוך שהוא מאפשר הדמיה ישירה.

A549-RFP נמצא בשימוש נרחב במערכות תרבית משותפת, במודלים של שתלים זרים אורתוטופיים ואקטופיים, ובבדיקות פלישה או גרורות שבהן תיוג פלואורסצנטי מקל על הבחנה בין תאי הגידול לרכיבי הסטרומה או המארח. הפלואורסצנציה האדומה היציבה תומכת ביישומים כגון הדמיית תאים חיים, סינון תוכן גבוה, כימות מבוסס ציטומטריית זרימה, והדמיה אופטית in vivo. כגרסה הניתנת למעקב של מודל אדנוקרצינומה ריאתית המאופיין היטב, A549-RFP מספק פלטפורמה איתנה לחקר התרבות תאי הגידול, מעבר אפיתל-מזנכימלי, תגובה לתרופות, ואינטראקציות בין הגידול לסביבתו המיקרו-סביבתית, הן בתנאי מעבדה (in vitro) והן בתנאי חיים (in vivo).

שינוי גנטי: שונה באופן יציב באמצעות העברה לנטרווירוס שאינו מסוגל לשכפל את עצמו, כדי לבטא חלבון פלואורסצנטי אדום (RFP) כגלאי; נשמר כאוכלוסייה פוליקלונלית תחת סלקציה של פורומיצין (1–5 µg/mL). רמת אבטחה S1/BSL-1.

37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.

לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו