A549-RFP

A549-RFP er et fluorescensmerket derivat av den humane A549-cellelinjen for lungeadenokarsinom, som er genetisk modifisert til å uttrykke rødt fluorescerende protein (RFP) kontinuerlig for visualisering og sporing i sanntid. Den opprinnelige A549-linjen ble etablert fra et lungeadenokarsinom hentet fra en voksen donor og viser epitelial morfologi med vedheftende vekstegenskaper. A549-celler beholder egenskaper fra type II-alveolære epitelceller, inkludert uttrykk for cytokeratiner og evnen til å produsere overflateaktive proteiner. Innføringen av en stabil RFP-ekspresjonskassett muliggjør kontinuerlig fluorescens uten å endre de iboende proliferative og metabolske egenskapene til den opprinnelige linjen i nevneverdig grad, noe som gjør A549-RFP egnet for longitudinelle bildediagnostiske studier.

Funksjonell karakterisering av A549-celler innenfor store kreftcellepaneler har vist at cellestørrelse, proteininnhold og proteinsyntesehastighet er positivt korrelert med cellevolum, og at større celler har en tendens til å proliferere langsommere. I sammenlignende analyser plasseres A549-celler blant relativt mindre, raskere prolifererende epiteliale kreftcellelinjer, i motsetning til større, mer mesenkymlignende celler som viser høyere vimentinuttrykk og lavere E-kadherinnivåer. Disse metabolske og fenotypiske forskjellene er relevante for eksperimentell tolkning, ettersom proteinsyntesehastigheter og metabolske strømninger varierer med cellestørrelsen og påvirker følsomheten overfor midler som retter seg mot proliferasjon eller mTOR-regulerte anabolske signalveier. RFP-modifikasjonen bevarer A549-cellers egnethet for slike metabolske og farmakologiske undersøkelser, samtidig som den muliggjør direkte visualisering.

A549-RFP brukes mye i samdyrkningssystemer, ortotopiske og ektopiske xenotransplantasjonsmodeller samt invasjons- eller metastasetester der fluorescerende merking gjør det lettere å skille tumorceller fra stromale eller vertskomponenter. Den stabile røde fluorescensen støtter anvendelser som blant annet avbildning av levende celler, high-content-screening, kvantifisering basert på strømningscytometri og optisk avbildning in vivo. Som en sporbart variant av en velkarakterisert lungeadenokarsinom-modell gir A549-RFP en robust plattform for å studere tumorcelleproliferasjon, epitel-mesenkymal overgang, legemiddelrespons og interaksjoner mellom tumor og mikromiljø både in vitro og in vivo.

Genetisk modifisering: Stabilt modifisert ved replikasjonsinkompetent lentiviral transduksjon for å uttrykke et rødt fluorescerende protein (RFP) som reporter; opprettholdes som en polyklonal populasjon under puromycin-seleksjon (1–5 µg/mL). S1/BSL-1-inneslutning.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring