A549-RFP

A549-RFP is een met fluorescentie gemerkt derivaat van de menselijke A549-longadenocarcinoomcellijn, dat zo is gemodificeerd dat het constitutief rood fluorescerend eiwit (RFP) tot expressie brengt voor realtime visualisatie en tracking. De oorspronkelijke A549-lijn is opgezet uit een longadenocarcinoom afkomstig van een volwassen donor en vertoont een epitheliale morfologie met kenmerken van hechtende groei. A549-cellen behouden kenmerken van type II alveolaire epitheelcellen, waaronder de expressie van cytokeratines en het vermogen tot de productie van surfactant-geassocieerde eiwitten. De introductie van een stabiele RFP-expressiecassette maakt continue fluorescentie mogelijk zonder de intrinsieke proliferatieve en metabolische eigenschappen van de oorspronkelijke lijn significant te veranderen, waardoor A549-RFP geschikt is voor longitudinale beeldvormingsstudies.

Functionele karakterisering van A549-cellen binnen grote panelen van kankercellen heeft aangetoond dat celgrootte, eiwitgehalte en eiwitsynthesesnelheid positief gecorreleerd zijn met het celvolume, en dat grotere cellen de neiging hebben om langzamer te prolifereren. In vergelijkende analyses behoren A549-cellen tot de relatief kleinere, sneller prolifererende epitheliale kankercellijnen, in tegenstelling tot grotere, meer mesenchymale cellen die een hogere vimentine-expressie en lagere E-cadherine-niveaus vertonen. Deze metabolische en fenotypische verschillen zijn relevant voor de interpretatie van experimenten, aangezien de eiwitsynthesesnelheid en de metabolische fluxen evenredig zijn met de celgrootte en de gevoeligheid beïnvloeden voor middelen die gericht zijn op proliferatie of door mTOR gereguleerde anabole routes. De RFP-modificatie zorgt ervoor dat A549-cellen geschikt blijven voor dergelijke metabolische en farmacologische onderzoeken, terwijl ze tegelijkertijd direct zichtbaar worden gemaakt.

A549-RFP wordt op grote schaal gebruikt in co-cultuursystemen, orthotope en ectope xenotransplantaatmodellen en invasie- of metastase-assays, waarbij fluorescerende markering het onderscheid tussen tumorcellen en stromale of gastheercomponenten vergemakkelijkt. De stabiele rode fluorescentie ondersteunt toepassingen zoals beeldvorming van levende cellen, high-content screening, kwantificering op basis van flowcytometrie en in vivo optische beeldvorming. Als traceerbare variant van een goed gekarakteriseerd longadenocarcinoommodel biedt A549-RFP een robuust platform voor het bestuderen van de proliferatie van tumorcellen, de epitheliaal-mesenchymale overgang, de reactie op geneesmiddelen en interacties tussen de tumor en de micro-omgeving, zowel in vitro als in vivo.

Genetische modificatie: Stabiel gemodificeerd door replicatie-incompetente lentivirale transductie om een rode fluorescerende proteïne (RFP)-reporter tot expressie te brengen; in stand gehouden als een polyklonale populatie onder puromycineselectie (1–5 µg/mL). S1/BSL-1-beveiligingsniveau.

37°C, 5%_CO2, bevochtigde atmosfeer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

Bij Cytion staan we achter de kwaliteit en levensvatbaarheid van onze producten. We garanderen dat onze cellen levensvatbaar zijn bij het begin van de kweek gedurende 60 dagen na verzending vanuit onze faciliteiten. We verzekeren dat alle materialen voldoen aan de specificaties beschreven in het analysecertificaat en/of productblad

Raadpleeg voor volledige informatie onze <a href=""/Wie-zijn-wij/Garantie/"" hreflang=""x-default"">Garantieverklaring