A549-RFP

A549-RFP é um derivado marcado com fluorescência da linhagem celular humana A549 de adenocarcinoma pulmonar, modificada geneticamente para expressar constitutivamente a proteína fluorescente vermelha (RFP) para visualização e rastreamento em tempo real. A linhagem parental A549 foi estabelecida a partir de um adenocarcinoma pulmonar derivado de um doador adulto e apresenta morfologia epitelial com características de crescimento aderente. As células A549 mantêm características das células epiteliais alveolares do tipo II, incluindo a expressão de citoqueratinas e a capacidade de produzir proteínas associadas ao surfactante. A introdução de uma cassete de expressão estável de RFP permite fluorescência contínua sem alterar significativamente as propriedades proliferativas e metabólicas intrínsecas da linhagem parental, tornando a A549-RFP adequada para estudos de imagem longitudinais.

A caracterização funcional das células A549 em amplos painéis de células cancerosas demonstrou que o tamanho celular, o conteúdo proteico e a taxa de síntese proteica estão positivamente correlacionados com o volume celular, e que células maiores tendem a proliferar mais lentamente. Em análises comparativas, as células A549 situam-se entre as linhagens de células epiteliais cancerosas relativamente menores e de proliferação mais rápida, em contraste com células maiores e de caráter mais mesenquimal, que apresentam maior expressão de vimentina e níveis mais baixos de E-caderina. Essas distinções metabólicas e fenotípicas são relevantes para a interpretação experimental, uma vez que as taxas de síntese proteica e os fluxos metabólicos variam de acordo com o tamanho celular e influenciam a sensibilidade a agentes que têm como alvo a proliferação ou as vias anabólicas reguladas pelo mTOR. A modificação com RFP preserva a adequação das células A549 para tais investigações metabólicas e farmacológicas, ao mesmo tempo em que permite a visualização direta.

A549-RFP é amplamente utilizada em sistemas de cocultura, modelos de xenoenxertos ortotópicos e ectópicos e ensaios de invasão ou metástase, nos quais a marcação fluorescente facilita a distinção entre células tumorais e componentes estromais ou do hospedeiro. A fluorescência vermelha estável permite aplicações que incluem imagens de células vivas, triagem de alto conteúdo, quantificação baseada em citometria de fluxo e imagens ópticas in vivo. Como variante rastreável de um modelo bem caracterizado de adenocarcinoma de pulmão, o A549-RFP oferece uma plataforma robusta para o estudo da proliferação de células tumorais, da transição epitelial-mesenquimal, da resposta a medicamentos e das interações entre o tumor e o microambiente, tanto em condições in vitro quanto in vivo.

Modificação genética: Modificado de forma estável por transdução lentiviral incompetente para replicação, a fim de expressar um repórter de proteína fluorescente vermelha (RFP); mantido como uma população policlonal sob seleção com puromicina (1–5 µg/mL). Contenção S1/BSL-1.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.