A549-RFP

A549-RFP es un derivado marcado con fluorescencia de la línea celular humana A549 de adenocarcinoma pulmonar, modificada genéticamente para expresar de forma constitutiva la proteína fluorescente roja (RFP) con el fin de permitir su visualización y seguimiento en tiempo real. La línea parental A549 se estableció a partir de un adenocarcinoma pulmonar procedente de un donante adulto y presenta una morfología epitelial con características de crecimiento adherente. Las células A549 conservan las características de las células epiteliales alveolares de tipo II, incluida la expresión de citoqueratinas y la capacidad de producir proteínas asociadas al surfactante. La introducción de un casete de expresión estable de RFP permite una fluorescencia continua sin alterar significativamente las propiedades proliferativas y metabólicas intrínsecas de la línea parental, lo que hace que la A549-RFP sea adecuada para estudios de imagen longitudinal.

La caracterización funcional de las células A549 dentro de amplios paneles de células cancerosas ha demostrado que el tamaño celular, el contenido proteico y la tasa de síntesis proteica están correlacionados positivamente con el volumen celular, y que las células más grandes tienden a proliferar más lentamente. En análisis comparativos, las células A549 se sitúan entre las líneas celulares epiteliales cancerosas relativamente más pequeñas y de proliferación más rápida, en contraste con las células más grandes y de carácter más mesenquimal, que presentan una mayor expresión de vimentina y niveles más bajos de E-cadherina. Estas diferencias metabólicas y fenotípicas son relevantes para la interpretación experimental, ya que las tasas de síntesis proteica y los flujos metabólicos varían en función del tamaño celular e influyen en la sensibilidad a los agentes dirigidos a la proliferación o a las vías anabólicas reguladas por mTOR. La modificación con RFP mantiene la idoneidad de las células A549 para este tipo de investigaciones metabólicas y farmacológicas, al tiempo que permite su visualización directa.

La línea A549-RFP se utiliza ampliamente en sistemas de cocultivo, modelos de xenoinjertos ortotópicos y ectópicos, y ensayos de invasión o metástasis, en los que el marcaje fluorescente facilita la discriminación de las células tumorales respecto a los componentes estromales o del huésped. La fluorescencia roja estable permite aplicaciones como la obtención de imágenes de células vivas, el cribado de alto contenido, la cuantificación basada en citometría de flujo y la obtención de imágenes ópticas in vivo. Como variante trazable de un modelo de adenocarcinoma pulmonar bien caracterizado, A549-RFP proporciona una plataforma robusta para estudiar la proliferación de células tumorales, la transición epitelial-mesenquimal, la respuesta a fármacos y las interacciones entre el tumor y su microambiente, tanto en entornos in vitro como in vivo.

Modificación genética: Modificado de forma estable mediante transducción con lentivirus incompetentes para la replicación, a fin de expresar un reportero de proteína fluorescente roja (RFP); se mantiene como una población policlonal bajo selección con puromicina (1–5 µg/mL). Contención S1/BSL-1.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

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