Skip to content
HEK293-VEGF-TM
Tissue
כליה עוברית
Disease
עבר שינוי/הונצח; אינו גורם לגידולים (על רקע HEK293)

Documents

HEK293-VEGF-TM

Cell line · Product number 305991

Disclaimer: The prices displayed for cell lines are exclusively for academic/not-for-profit customers. For commercial entitites the pr...

US$1,600.00excl. tax and shipping
Made to order
1

01General information

Description

הצהרת הבהרה: המחירים המוצגים עבור קווי תאים מיועדים אך ורק ללקוחות אקדמיים/ללא כוונת רווח. עבור גופים מסחריים, המחיר הוא כ-6,250 אירו.
אם אתה מייצג גוף מסחרי או שאינך בטוח לאיזו קטגוריה אתה משתייך, אנא פנה אלינו.


תאי HEK293-VEGF-TM הם תאי כליה עובריים אנושיים 293 (HEK293) שהונדסו כדי לבטא באופן יציב צורה קשורה לממברנה של גורם גדילה אנדותליאלי וסקולרי (VEGF), המיועדת בדרך כלל להציג VEGF על פני התא באמצעות מיזוג עם תחום טרנסממברני. בניגוד לאיזופורמים מסיסים של VEGF המופרשים לסביבה החוץ-תאית, מבנים של VEGF-TM מאפשרים הצגה מקומית ומתמשכת של ליגנדים של VEGF על קרום הפלזמה, מה שמקל על חקירה מבוקרת של אינטראקציות קולטני VEGF ומנגנוני איתות בין-תאיים. מודלים מהונדסים אלה שימושיים לחקר מסלולי איתות אנגיוגניים המתווכים בעיקר באמצעות VEGFR1 (FLT1) ו-VEGFR2 (KDR), המווסתים את התרבות האנדותל, הנדידה, חדירות כלי הדם והיווצרות כלי דם חדשים.

תאי HEK293-VEGF-TM נמצאים בשימוש נרחב במחקר אנגיוגנזה ובפיתוח טיפולי לאפיון נוגדנים המכוונים ל-VEGF, מלכודות קולטנים, תרופות ביולוגיות אנטי-אנגיוגניות וטיפולים בתאי חיסון מהונדסים. הצגת ה-VEGF המוצמדת לקרום מאפשרת הערכה כמותית של קישור לקולטנים, נגישות הליגנד, חסימת נוגדנים, התקבצות קולטנים ואירועי איתות התלויים במגע בין תאים. תאים אלה בעלי ערך רב במיוחד בבדיקות קישור מבוססות ציטומטריית זרימה, במערכות תרבית משותפת, בבדיקות רפורטרים ובפלטפורמות סינון בעלות תפוקה גבוהה המעריכות עיכוב של מסלול VEGF/VEGFR. בנוסף, מודלים של HEK293-VEGF-TM יכולים לתמוך במחקרים הבוחנים היווצרות סינפסות וזיהוי מטרות על ידי תאי CAR-T המכוונים ל-VEGF או פלטפורמות נוגדנים דו-ספציפיים.

Tissue
כליה עוברית
Disease
עבר שינוי/הונצח; אינו גורם לגידולים (על רקע HEK293)
Applications
מחקר בנושא VEGF טרנסממברני (VEGF-TM); פיתוח נוגדנים נגד VEGF; מחקרים בנושא אנגיוגנזה של גידולים; בדיקות ADCC/CDC; ציטומטריית זרימה; מחקר באונקולוגיה וברפואת עיניים

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This HEK293 cell line contains a transmembrane VEGF (VEGF-TM) expression construct for cell-surface VEGF studies and anti-angiogenic therapy development. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
דמוי אפיתל
Cell type
תאי אפיתל
Doubling time
כ-24–36 שעות

04Identifiers

Citation
HEK293-VEGF-TM (מספר קטלוגי של Cytion: 305991)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_6G30

05Expression and susceptibility

Receptors expressed
VEGF-TM

06Handling and culture

Culture medium
RPMI 1640, w: 2.0 mM גלוטמין יציב, w: 2.0 g/L NaHCO3 (מספר קטלוגי של Cytion 820700a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתמיסה 10% FBS, 1 mM נתרן פירובט, 10 mM HEPES, 1% NEAA. הוסף Geneticin (G418-Sulfat) עד לריכוז סופי של 1 מ"ג/מ"ל.
Dissociation reagent
טריפסין-EDTA
Subculturing
לגידול תאים נצמדים שגרתי: שאבו את המדיום הישן מהתאים הנצמדים ושטפו אותם ב-PBS כדי להסיר את כל שאריות המדיום. לאחר שאיבת ה-PBS, הוסף את הנפח המתאים של תמיסת טריפסין/EDTA בהתאם לגודל כלי התרבית (לדוגמה, 1 מ"ל עבור בקבוק T25, 3 מ"ל עבור בקבוק T75) והדגר בטמפרטורת החדר או ב-37°C עד שהתאים יתנתקו (5-10 דקות). עקבו אחר ההתנתקות תחת מיקרוסקופ, ובמידת הצורך טפחו קלות על הכלי כדי לשחרר את התאים. לאחר ההתנתקות, הוסיפו מדיום שלם כדי להשבית את הטריפסין/EDTA, ערבבו קלות את התאים והעבירו חלק מהתמיסה לתוך כלי תרבית חדש המכיל מדיום טרי. הכניסו את הכלי לאינקובטור המכוון ל-37°C עם 5%CO2, והחליפו את המדיום כל 2-3 ימים.
Split ratio
1 עד 5
Seeding density
2 עד 4 x 104 תאים/סמ"ר
Fluid renewal
2 עד 3 פעמים בשבוע
Post-thaw recovery

לאחר ההפשרה, חלקו את התאים ביחס של 1:2 עד 1:3 בצלוחיות T25 והניחו לתאים להתאושש מתהליך ההקפאה ולהידבק למשך 24 שעות לפחות.

לקבלת הידבקות וחיוניות מיטביות לאחר הפשרת התאים, אנו ממליצים להשתמש בבקבוקים או בצלחות מצופים בקולגן לזרע הראשוני לאחר ההתאוששות מהקפאה. ציפוי בקולגן אינו נדרש לגידול שגרתי של התאים לאחר מכן.

Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

08Donor

Donor age
עובר