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MRC-9
Gewebe
Fötale Lunge
Synonyme
MRC9, Medical Research Council cell strain-9

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MRC-9

Cell line · Artikelnummer 300394

The MRC-9 cell line is a human diploid fibroblast strain derived from the lungs of a White female fetus at 15 weeks gestation. It was established for long...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die MRC-9-Zelllinie ist ein menschlicher diploider Fibroblastenstamm, der aus der Lunge eines weiblichen weißen Fötus im Alter von 15 Wochen gewonnen wird. Sie wurde für den langfristigen Einsatz in der biologischen Forschung, der Impfstoffherstellung und der diagnostischen Virologie entwickelt. Die Zellen weisen adhärente Wachstumseigenschaften auf und behalten bei serieller Vermehrung einen stabilen, diploiden Karyotyp bei. Wichtig ist, dass MRC-9-Zellen normale chromosomale Merkmale aufweisen und unter typischen Bedingungen nicht tumorerzeugend sind. Sie haben jedoch tumorigene Eigenschaften gezeigt, wenn sie in halbfesten Medien getestet wurden, aber nicht, wenn sie in immunsupprimierte Mäuse implantiert wurden.

MRC-9-Zellen werden häufig für Studien zur Virusanfälligkeit verwendet und zeigen eine breite Anfälligkeit für verschiedene Viren wie Poliovirus, Adenovirus, Röteln und Cytomegalovirus. Diese Zellen sind besonders wertvoll für den Einsatz in der virologischen Forschung und der Impfstoffentwicklung. Obwohl ihre Vermehrungsrate im Vergleich zu anderen menschlichen Fibroblastenstämmen wie MRC-5 langsamer ist, können MRC-9-Zellen dennoch eine beträchtliche Anzahl von Populationsverdopplungen durchlaufen, wobei von bis zu 46 Verdopplungen berichtet wurde.

Gewebe
Fötale Lunge
Synonyme
  • MRC9
  • Medical Research Council cell strain-9

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Zelltyp
Fibroblasten

04Bezeichner

Quellenangabe
MRC-9 (Cytion-Katalognummer 300394)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_2629

05Handhabung und Kultur

Nährmedium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion-Artikelnummer 820100a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS und 1% NEAA
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

07Spender

Alter des Spenders
Fötus