Siirry sisältöön
MRC-9
Kudos
Sikiön keuhkot
Synonyymit
MRC9, Medical Research Council cell strain-9

Asiakirjat

MRC-9

Cell line · Tuotenumero 300394

The MRC-9 cell line is a human diploid fibroblast strain derived from the lungs of a White female fetus at 15 weeks gestation. It was established for long...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

MRC-9-solulinja on ihmisen diploidinen fibroblastikanta, joka on peräisin 15 raskausviikolla syntyneen valkoihoisen naarassikiön keuhkoista. Se on perustettu pitkäaikaiseen käyttöön biologisessa tutkimuksessa, rokotteiden valmistuksessa ja diagnostisessa virologiassa. Soluilla on tarttuvat kasvuominaisuudet ja ne säilyttävät vakaan diploidisen karyotyypin koko sarjaperäisen lisääntymisen ajan. Tärkeää on, että MRC-9-soluilla on normaalit kromosomipiirteet ja että ne eivät ole kasvaimia aiheuttavia tyypillisissä olosuhteissa. Ne ovat kuitenkin osoittaneet tuumorigeenisiä ominaisuuksia, kun niitä testattiin puolikiinteässä väliaineessa, mutta eivät, kun ne istutettiin immunosuppressoituun hiireen.

MRC-9-soluja on käytetty laajalti virusherkkyystutkimuksissa, ja ne ovat osoittaneet laajaa herkkyyttä erilaisille viruksille, kuten poliovirukselle, adenovirukselle, vihurirokolle ja sytomegalovirukselle. Nämä solut ovat erityisen arvokkaita, koska niitä käytetään virologian tutkimuksessa ja rokotteiden kehittämisessä. Vaikka niiden lisääntymisnopeus on hitaampi kuin muiden ihmisen fibroblastikantojen, kuten MRC-5:n, solujen, MRC-9:n solut voivat silti kokea huomattavan määrän populaatiokaksinkertaistumisia, joista on raportoitu jopa 46 kaksinkertaistumista.

Kudos
Sikiön keuhkot
Synonyymit
  • MRC9
  • Medical Research Council cell strain-9

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Solutyyppi
Fibroblastit

04Tunnisteet

Lähdeviite
MRC-9 (Cytionin luettelonumero 300394)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_2629

05Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiini, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytionin artikkelinumero 820100a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 % FBS:llä ja 1 % NEAA:lla
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

07Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
Sikiö