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MRC-9
Tessuto
Polmone fetale
Sinonimi
MRC9, Medical Research Council cell strain-9

Documenti

MRC-9

Cell line · Codice prodotto 300394

The MRC-9 cell line is a human diploid fibroblast strain derived from the lungs of a White female fetus at 15 weeks gestation. It was established for long...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare MRC-9 è un ceppo di fibroblasti diploidi umani derivati dai polmoni di un feto bianco di 15 settimane di gestazione. È stata creata per essere utilizzata a lungo termine nella ricerca biologica, nella produzione di vaccini e nella virologia diagnostica. Le cellule presentano proprietà di crescita aderente e mantengono un cariotipo diploide stabile durante la propagazione in serie. È importante notare che le cellule MRC-9 possiedono caratteristiche cromosomiche normali e non sono tumorigeniche in condizioni tipiche. Tuttavia, hanno dimostrato proprietà tumorigeniche quando sono state testate in mezzi semisolidi, ma non quando sono state impiantate in topi immunosoppressi.

Le cellule MRC-9 sono state ampiamente utilizzate per studi di suscettibilità virale, dimostrando un'ampia suscettibilità a vari virus come poliovirus, adenovirus, rosolia e citomegalovirus. Queste cellule sono particolarmente preziose per l'uso nella ricerca virologica e nello sviluppo di vaccini. Sebbene il loro tasso di proliferazione sia più lento rispetto ad altri ceppi di fibroblasti umani come MRC-5, le cellule MRC-9 possono comunque subire un numero significativo di raddoppi di popolazione, con segnalazioni fino a 46 raddoppi.

Tessuto
Polmone fetale
Sinonimi
  • MRC9
  • Medical Research Council cell strain-9

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Tipo di cellula
Fibroblasti

04Identificatori

Riferimento bibliografico
MRC-9 (catalogo Cytion numero 300394)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_2629

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
Feto