HEK293-CTLA4

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La línea celular HEK293-CTLA4 es una línea celular HEK293 recombinante estable diseñada para expresar el receptor CTLA4 a un nivel medio-bajo, aproximadamente 4000 moléculas por célula. Esta línea celular se desarrolló utilizando la tecnología Landing Pad de inscreenex, lo que garantiza una integración precisa y reproducible del gen CTLA4 en un locus genómico específico y previamente validado. CTLA4, también conocido como CD152, es una proteína de punto de control inmunitario que desempeña un papel crucial en la regulación de la activación de las células T. Al competir con el receptor estimulador CD28 por la unión a las moléculas B7 (CD80 y CD86) en las células presentadoras de antígenos, el CTLA4 modula a la baja las respuestas inmunitarias, manteniendo así la autotolerancia y previniendo la autoinmunidad. El CTLA4 es una diana clave en la inmunoterapia contra el cáncer, especialmente para fármacos como el ipilimumab, cuyo objetivo es potenciar la inmunidad antitumoral bloqueando este punto de control y activando las células T.

La expresión de CTLA4 en esta línea celular se confirmó mediante citometría de flujo con un anticuerpo específico para el objetivo, lo que garantizó una densidad de receptores fiable y consistente en toda la población celular.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

Tras la descongelación, dividir las células en una proporción de 1:2 a 1:3 en matraces T25 y dejar que las células se recuperen del proceso de congelación y se adhieran (para cultivos adherentes) durante al menos 24 horas.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

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