Gå til innholdet
HEK293-CTLA4
Vev
Fosterets nyre
Sykdom
Transformert/immortaliseret; ikke-tumorogen (HEK293-bakgrunn)

Dokumenter

HEK293-CTLA4

Cell line · Produktnummer 305423

Ansvarsfraskrivelse: Prisene som vises for cellelinjer gjelder utelukkende for akademiske kunder og kunder uten profittformål. For kommersielle aktører gjelder prisene...

€1,900.00ekskl. mva. og frakt
Lages på bestilling
1

01Generell informasjon

Beskrivelse

Ansvarsfraskrivelse: Prisene som vises for cellelinjer gjelder utelukkende for akademiske kunder og ideelle organisasjoner. For kommersielle aktører er prisen ca. 6 250 euro.
Hvis du representerer en kommersiell aktør eller er usikker på hvilken kategori som gjelder, vennligst kontakt oss.


HEK293-CTLA4-cellelinjen er en stabil rekombinant HEK293-cellelinje som er utviklet for å uttrykke CTLA4-reseptoren på et middels-lavt nivå, ca. 4 000 molekyler per celle. Denne cellelinjen ble utviklet ved hjelp av inscreenex' landing pad-teknologi, som sikrer presis og reproduserbar integrering av CTLA4-genet på et spesifikt, forhåndsvaliderte genomisk lokus. CTLA4, også kjent som CD152, er et immun-sjekkpunktprotein som spiller en avgjørende rolle i reguleringen av T-celleaktivering. Ved å konkurrere med den stimulerende reseptoren CD28 om binding til B7-molekyler (CD80 og CD86) på antigenpresenterende celler, nedregulerer CTLA4 immunresponser, og opprettholder dermed selvtoleranse og forhindrer autoimmunitet. CTLA4 er et sentralt mål i kreftimmunoterapi, særlig for legemidler som ipilimumab, som har som mål å styrke antitumorimmuniteten ved å blokkere dette kontrollpunktet og aktivere T-celler.

Ekspresjonen av CTLA4 i denne cellelinjen ble bekreftet ved hjelp av strømningscytometri med et målspesifikt antistoff, noe som sikrer pålitelig og konsistent reseptortetthet i hele cellepopulasjonen.

Vev
Fosterets nyre
Sykdom
Transformert/immortaliseret; ikke-tumorogen (HEK293-bakgrunn)
Søknader
Forskning på kontrollpunktinhibitorer; utvikling av antistoffer rettet mot CTLA-4 (ipilimumab, tremelimumab-analoger); analyser av T-celle-kostimulering; screening innen immunonkologi; utvikling av bispesifikke antistoffer

02Klassifisering

Organisme
Menneske
Sex
Kvinne
Vekstegenskaper
Tilhenger
GMO-status
GMO-S1
Detaljer om GMO-status
GMO-S1: This HEK293 variant contains a CTLA-4 expression construct for immune checkpoint research. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosikkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Epitel-lignende
Celletype
Epitelceller
Fordoblingstid
ca. 24–36 timer

04Identifikatorer

Kildehenvisning
HEK293-CTLA4 (Cytion katalognummer 305423)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_6G20

05Uttrykk og mottakelighet

Reseptorer som uttrykkes
CTLA4 (CD152)

06Håndtering og kultur

Næringsmedium
RPMI 1640, m: 2,0 mM stabil glutamin, m: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion artikkelnummer 820700a)
Inkubasjonsatmosfære

37 °C, 5 %CO2, befuktet atmosfære.

Kosttilskudd
Suppler mediet med 10 % FBS, 1 mM natriumpyruvat, 10 mM HEPES, 1 % NEAA. Tilsett Geneticin (G418-Sulfat) for å oppnå en sluttkonsentrasjon på 1 mg/ml.
Dissosiasjonsmiddel
Trypsin-EDTA
Subkultivering
For rutinemessig adherent cellekultur: Aspirer det gamle dyrkningsmediet fra de adherente cellene, og vask dem med PBS for å fjerne eventuelt gjenværende medium. Etter at PBS er aspirert, tilsett et passende volum Trypsin/EDTA-løsning basert på størrelsen på dyrkingskaret (f.eks. 1 ml for en T25-kolbe, 3 ml for en T75-kolbe), og inkuber ved romtemperatur eller 37 °C til cellene løsner (5-10 minutter). Overvåk løsrivelsen under mikroskop, og bank forsiktig på beholderen om nødvendig for å frigjøre cellene. Når cellene har løsnet, tilsett komplett medium for å inaktivere trypsin/EDTA, resuspender cellene forsiktig, og overfør en alikvot av cellesuspensjonen til et nytt dyrkingskar som inneholder nytt medium. Plasser karet i en inkubator innstilt på 37 °C med 5 %CO2, og bytt medium hver 2.-3. dag.
Oppdelingsforhold
1 til 5
Såtetthet
2 til 4 x 104 celler/cm2
Væskefornyelse
2 til 3 ganger per uke
Gjenoppretting etter tining

Etter tining deles cellene i forholdet 1:2 til 1:3 i T25-kolber, og cellene får komme seg etter fryseprosessen og feste seg (for adherente kulturer) i minst 24 timer.

Tining og dyrking
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll og kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

Frysemedium
Som kryopreserveringsmedium bruker vi komplett vekstmedium (inkludert FBS) + 10 % DMSO for tilstrekkelig levedyktighet etter opptining, eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som inneholder optimaliserte osmobeskyttende midler og metabolske stabilisatorer for å øke utvinningen og redusere kryoindusert stress.
Oppbevaringsbetingelser

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Fraktvilkår

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

08Donor

Donorens alder
Foster