Prejsť na obsah
HEK293-CTLA4
Tkanivo
Fetálne obličky
Choroba
Transformované/imortalizované; netumorogénne (na základe buniek HEK293)

Dokumenty

HEK293-CTLA4

Cell line · Číslo výrobku 305423

Upozornenie: Ceny uvedené pri bunkových líniách platia výlučne pre akademických a neziskových zákazníkov. Pre komerčné subjekty platia ceny...

€1,900.00bez DPH a poštovného
Na objednávku
1

01Všeobecné informácie

Popis

Upozornenie: Uvedené ceny bunkových línií platia výlučne pre akademických a neziskových zákazníkov. Pre komerčné subjekty je cena približne 6 250 €.
Ak zastupujete komerčný subjekt alebo si nie ste istí, do ktorej kategórie patríte, prosím, kontaktujte nás.


Bunková línia HEK293-CTLA4 je stabilná rekombinantná bunková línia HEK293, ktorá bola geneticky upravená tak, aby exprimovala receptor CTLA4 na stredne nízkej úrovni, približne 4 000 molekúl na bunku. Táto bunková línia bola vyvinutá pomocou technológie „landing pad“ spoločnosti inscreenex, ktorá zabezpečuje presnú a reprodukovateľnú integráciu génu CTLA4 na špecifickom, vopred validovanom genómovom lokuse. CTLA4, známy aj ako CD152, je proteín imunitného kontrolného bodu, ktorý zohráva kľúčovú úlohu v regulácii aktivácie T-buniek. Tým, že súťaží so stimulačným receptorom CD28 o väzbu na molekuly B7 (CD80 a CD86) na bunkách prezentujúcich antigén, CTLA4 potláča imunitné reakcie, čím udržiava autotoleranciu a zabraňuje autoimunitným reakciám. CTLA4 je kľúčovým cieľom v imunoterapii rakoviny, najmä pre lieky ako ipilimumab, ktorých cieľom je posilniť protinádorovú imunitu blokovaním tohto kontrolného bodu a aktiváciou T-buniek.

Expresia CTLA4 v tejto bunkovej línii bola potvrdená pomocou prietokovej cytometrie s protilátkou špecifickou pre cieľ, čím sa zabezpečila spoľahlivá a konzistentná hustota receptora v celej bunkovej populácii.

Tkanivo
Fetálne obličky
Choroba
Transformované/imortalizované; netumorogénne (na základe buniek HEK293)
Aplikácie
Výskum inhibítorov kontrolných bodov; vývoj protilátok zameraných na CTLA-4 (ipilimumab, analógy tremelimumabu); testy kostimulácie T-buniek; skríning v oblasti imunoonkológie; vývoj bispecifických protilátok

02Klasifikácia

Organizmus
Človek
Sex
Žena
Rastové vlastnosti
Prívrženec
Stav GMO
GMO-S1
Podrobnosti o štatúte GMO
GMO-S1: This HEK293 variant contains a CTLA-4 expression construct for immune checkpoint research. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Úroveň biologickej bezpečnosti
1

03Charakteristiky

Morfológia
Epitelu podobné
Typ bunky
Epitelové bunky
Doba zdvojnásobenia
cca 24–36 hodín

04Identifikátory

Citácia
HEK293-CTLA4 (katalógové číslo Cytion 305423)
Daňové identifikačné číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_6G20

05Prejav a náchylnosť

Exprimované receptory
CTLA4 (CD152)

06Manipulácia a kultivácia

Kultivačné médium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilný glutamín, w: 2,0 g/L NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820700a)
Inkubačná atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplnky stravy
Doplňte médium o 10 % FBS, 1 mM pyruvát sodný, 10 mM HEPES, 1 % NEAA. Pridajte geneticín (G418-Sulfat) na dosiahnutie konečnej koncentrácie 1 mg/ml.
Disociačné činidlo
Trypsín-EDTA
Rozmnožovanie kultúr
Na bežné adherentné bunkové kultúry: Odstráňte staré kultivačné médium z adherentných buniek a premyte ich PBS, aby ste odstránili zvyšné médium. Po odsatí PBS pridajte príslušný objem roztoku trypsínu/EDTA podľa veľkosti kultivačnej nádoby (napr. 1 ml pre banku T25, 3 ml pre banku T75) a inkubujte pri izbovej teplote alebo 37 °C, kým sa bunky neoddelia (5 - 10 minút). Oddeľovanie sledujte pod mikroskopom a v prípade potreby jemne poklepte na nádobu, aby sa bunky uvoľnili. Po oddelení pridajte kompletné médium na inaktiváciu trypsínu/EDTA, jemne resuspendujte bunky a alikvotnú časť bunkovej suspenzie preneste do novej kultivačnej nádoby obsahujúcej čerstvé médium. Nádobu umiestnite do inkubátora nastaveného na 37 °C s 5 %CO2 a médium vymieňajte každé 2 - 3 dni.
Pomer rozdelenia
1 až 5
Hustota výsevu
2 až 4 x 104 buniek/cm2
Obnova kvapaliny
2 až 3-krát týždenne
Zotavenie po rozmrazení

Po rozmrazení rozdeľte bunky v pomere 1:2 až 1:3 do banky T25 a nechajte bunky zotaviť sa z procesu zmrazovania a priľnúť (v prípade adhezívnych kultúr) aspoň 24 hodín.

Rozmrazovanie a kultivácia
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervácia

Sterilita

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Mrazové médium
Ako kryokonzervačné médium používame kompletné rastové médium (vrátane FBS) + 10 % DMSO na zabezpečenie primeranej životaschopnosti po rozmrazení alebo CM-1 (katalógové číslo 800100 spoločnosti Cytion), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie obnovy a zníženie stresu spôsobeného kryo.
Podmienky skladovania

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Dopravné podmienky

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

08Darca

Vek darcu
Plod