Ga naar de inhoud
HEK293-CTLA4
Weefsel
Foetale nier
Ziekte
Getransformeerd/vereeuwigd; niet-tumorogene (HEK293-achtergrond)

Documenten

HEK293-CTLA4

Cell line · Productnummer 305423

Disclaimer: De weergegeven prijzen voor cellijnen gelden uitsluitend voor academische klanten en klanten zonder winstoogmerk. Voor commerciële entiteiten gelden de pr...

€1,900.00excl. btw en verzendkosten
Op bestelling gemaakt
1

01Algemene informatie

Beschrijving

Disclaimer: De weergegeven prijzen voor cellijnen gelden uitsluitend voor academische klanten en klanten zonder winstoogmerk. Voor commerciële partijen bedraagt de prijs ongeveer € 6.250.
Als u een commerciële partij vertegenwoordigt of niet zeker weet tot welke categorie u behoort, neem dan contact met ons op.


De HEK293-CTLA4-cellijn is een stabiele recombinante HEK293-cellijn die is gemanipuleerd om de CTLA4-receptor op een gemiddeld-laag niveau tot expressie te brengen, ongeveer 4.000 moleculen per cel. Deze cellijn is ontwikkeld met behulp van de landing pad-technologie van inscreenex, wat zorgt voor een nauwkeurige en reproduceerbare integratie van het CTLA4-gen op een specifieke, vooraf gevalideerde genomische locus. CTLA4, ook bekend als CD152, is een immuuncheckpoint-eiwit dat een cruciale rol speelt bij het reguleren van de activering van T-cellen. Door te concurreren met de stimulerende receptor CD28 om binding aan B7-moleculen (CD80 en CD86) op antigeenpresenterende cellen, remt CTLA4 immuunreacties, waardoor zelftolerantie wordt gehandhaafd en auto-immuniteit wordt voorkomen. CTLA4 is een belangrijk doelwit in immuuntherapie tegen kanker, met name voor geneesmiddelen zoals ipilimumab, die tot doel hebben de antitumorimmuniteit te versterken door dit controlepunt te blokkeren en T-cellen te activeren.

De expressie van CTLA4 in deze cellijn werd bevestigd met behulp van flowcytometrie met een doelspecifiek antilichaam, waardoor een betrouwbare en consistente receptordichtheid in de gehele celpopulatie werd gewaarborgd.

Weefsel
Foetale nier
Ziekte
Getransformeerd/vereeuwigd; niet-tumorogene (HEK293-achtergrond)
Toepassingen
Onderzoek naar checkpointremmers; ontwikkeling van antilichamen gericht tegen CTLA-4 (ipilimumab, analogen van tremelimumab); co-stimulatieproeven met T-cellen; screening op het gebied van immuno-oncologie; ontwerp van bispecifieke antilichamen

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Groei-eigenschappen
Aanhanger
GGO-status
GMO-S1
Details over de GGO-status
GMO-S1: This HEK293 variant contains a CTLA-4 expression construct for immune checkpoint research. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtig
Celtype
Epitheelcellen
Verdubbelingstijd
ongeveer 24-36 uur

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
HEK293-CTLA4 (Cytion catalogusnummer 305423)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_6G20

05Expressie en vatbaarheid

Tot expressie gebrachte receptoren
CTLA4 (CD152)

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiele Glutamine, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820700a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS, 1 mM natriumpyruvaat, 10 mM HEPES, 1% NEAA. Voeg Geneticine (G418-Sulfat) toe tot een eindconcentratie van 1 mg/mL.
Dissociatiereagens
Trypsine-EDTA
Heruitplanten
Voor routinematige adherente celkweek: Zuig het oude kweekmedium van de adherente cellen af en was ze met PBS om eventueel achtergebleven medium te verwijderen. Voeg na het opzuigen van de PBS het juiste volume trypsine/EDTA-oplossing toe op basis van de grootte van het kweekvat (bijv. 1 ml voor een T25-kolf, 3 ml voor een T75-kolf) en incubeer bij kamertemperatuur of 37 °C totdat de cellen loskomen (5-10 minuten). Controleer de onthechting onder een microscoop en tik zo nodig voorzichtig op het vat om de cellen los te maken. Voeg na het losmaken volledig medium toe om de trypsine/EDTA te inactiveren, resuspendeer de cellen voorzichtig en breng een aliquot van de celsuspensie over in een nieuw kweekvat met vers medium. Plaats het kweekvat in een incubator die is ingesteld op 37°C met 5%CO2 en ververs het medium elke 2-3 dagen.
Splitsingsverhouding
1 tot en met 5
Zaaidichtheid
2 tot 4 x 104 cellen/cm2
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Herstel na ontdooiing

Splits de cellen na het ontdooien in een verhouding van 1:2 tot 1:3 in T25-flesjes en laat de cellen minstens 24 uur bijkomen van het vriesproces en zich hechten (voor adherente culturen).

Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
Foetus