Siirry sisältöön
HK EB3-EGFP
Kudos
Kohdunkaula
Sairaus
Syöpä
Synonyymit
HeLa Kyoto EB3-EGFP, HeLa Kyoto EB3 EGFP, HeLa Kyoto EGFP-EB3

Asiakirjat

HK EB3-EGFP

Cell line · Tuotenumero 300668

Hela Kyoto EB3-EGFP is a derivative of the HeLa Kyoto cell line, specifically engineered to express the End-Binding Protein 3 (EB3) tagged with Enhanced G...

€800.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa vähän
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

Hela Kyoto EB3-EGFP on HeLa Kyoto -solulinjan johdannainen, joka on erityisesti suunniteltu ilmentämään End-Binding Protein 3 (EB3) -proteiinia, joka on merkitty tehostetulla vihreällä fluoresoivalla proteiinilla (EGFP). Tätä solulinjaa käytetään yleisesti tutkimuksessa, jossa keskitytään mikrotubulusten dynamiikan ymmärtämiseen, koska EB3 on proteiini, joka assosioituu mikrotubulusten pluspäätteisiin, ja se on fluoresoiva merkintä. EGFP:n ilmentyminen tarjoaa fluoresoivan merkkiaineen, joka mahdollistaa mikrotubulusten käyttäytymisen reaaliaikaisen visualisoinnin elävissä soluissa fluoresenssimikroskoopilla.

Tämä solulinja on erityisen arvokas solubiologian ja syövän tutkimuksessa, jossa solun jakautumisen ja solunsisäisen kuljetuksen mekaniikan ymmärtäminen on ratkaisevan tärkeää. EB3-EGFP:n vakaa ilmentyminen ei häiritse mikrotubulusten normaaleja toimintoja, mikä tekee näistä soluista luotettavan välineen mikrotubulusten dynamiikasta riippuvaisten soluprosessien yksityiskohtaisiin tutkimuksiin.

Kudos
Kohdunkaula
Sairaus
Syöpä
Synonyymit
  • HeLa Kyoto EB3-EGFP
  • HeLa Kyoto EB3 EGFP
  • HeLa Kyoto EGFP-EB3

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
GMO-status
GMO-S1
GMO-statuksen tiedot
GMO-S1: This HeLa Kyoto EB3-EGFP line contains an EGFP-tagged EB3 construct for dynamic microtubule visualization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltaiset solut, joilla on mosaiikkimaisen kiven muotoinen rakenne

04Tunnisteet

Lähdeviite
HK EB3-EGFP (Cytionin luettelonumero 300668)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_1D61
Tallettaja
Ellenbergin laboratorio (EMBL)

05Ilmentyminen ja alttius

Proteiinin ilmentyminen
MEGFP (mikrotubuluksen päätä sitova proteiini 3 mEGFP-merkitty): 589 / Pcmv, 652..1497 / EB3, 1516..2235 / EGFP, 3466..4260 / KanR/NeoR
Tuotteet
CMV promoottori EB3, neomysiini, fosfotransferaasi

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM, w: 4,5 g/l glukoosia, w: 4 mM L-glutamiinia, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvaattia (Cytionin artikkelinumero 820300a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
1 x 104 solua/cm2
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulamisen jälkeinen palautuminen
Sulattamisen jälkeen levitä solut 5 x 104 solua/cm2 ja anna solujen toipua pakastusprosessista ja kiinnittyä vähintään 24 tunnin ajan.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
30 vuotta
Etnisyys
Afroamerikkalainen