HK EGFP-LaminB1/H2B-mCherry

HK EGFP-LaminB1/H2B-mCherry-solulinja on Hela Kiotosta peräisin oleva in vitro -malli, joka on suunniteltu kromatiinin dynamiikan ja ydinarkkitehtuurin reaaliaikaiseen visualisointiin elävissä soluissa. Tämä solulinja ilmentää kahta fluoresoivaa proteiinifuusiota: EGFP (tehostettu vihreä fluoresoiva proteiini), joka on fuusioitu Lamin B1:n kanssa, ja mCherry (punainen fluoresoiva proteiini), joka on fuusioitu histoni H2B:n kanssa. EGFP:n fuusio lamiini B1:n kanssa mahdollistaa ydinkuoren ja ydinlaminan havainnoinnin, sillä nämä rakenteet ovat kriittisiä ytimen eheyden ja toimivuuden ylläpitämisen kannalta. Lamiiniproteiinit ovat V-tyypin väliketjuproteiineja, jotka muodostavat sisemmän ydinkalvon alla olevan verkoston ja joilla on keskeinen rooli ytimen vakaudessa, kromatiinin järjestäytymisessä ja geenien säätelyssä.

Toisaalta mCherry-merkitty histoni H2B mahdollistaa kromatiinin visualisoinnin tuman sisällä. Histonit ovat nukleosomin peruskomponentteja, jotka osallistuvat DNA:n järjestäytymiseen kromatiiniksi ja ovat siten ratkaisevan tärkeitä DNA:n replikaatiolle, korjaukselle ja transkriptionille. H2B:n mCherry-merkki tuottaa eloisaa punaista fluoresenssia, joka erottuu EGFP:n vihreästä fluoresenssista, mikä mahdollistaa samanaikaisen kaksoiskuvan antamisen ytimen rakenteesta ja kromatiinista elävässä solussa tehtävissä kokeissa. Tätä solulinjaa käytetään yleisesti tutkimuksissa, joissa keskitytään ydinmekaniikkaan, mitoosiin ja genomin vakauteen, ja se tarjoaa dynaamisen näkymän soluprosesseihin, joita on muuten vaikea havainnoida reaaliajassa.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa