HK EGFP-LaminB1/H2B-mCherry

La lignée cellulaire HK EGFP-LaminB1/H2B-mCherry est un modèle in vitro dérivé de la lignée HeLa Kyoto, conçu pour la visualisation en temps réel de la dynamique de la chromatine et de l’architecture nucléaire dans des cellules vivantes. Cette lignée cellulaire exprime deux fusions de protéines fluorescentes : l’EGFP (protéine fluorescente verte améliorée) fusionnée à la Lamine B1, et la mCherry (une protéine fluorescente rouge) fusionnée à l’histone H2B. La fusion de l’EGFP avec la lamine B1 permet d’observer l’enveloppe nucléaire et la lamina nucléaire, des structures essentielles au maintien de l’intégrité et de la fonctionnalité du noyau. Les protéines de lamine sont des protéines de filaments intermédiaires de type V qui forment un réseau sous-jacent à la membrane nucléaire interne, jouant des rôles clés dans la stabilité nucléaire, l’organisation de la chromatine et la régulation génique.

D’autre part, l’histone H2B marquée par mCherry permet la visualisation de la chromatine à l’intérieur du noyau. Les histones sont des composants fondamentaux du nucléosome, impliquées dans l’organisation de l’ADN en chromatine, ce qui les rend cruciales pour la réplication, la réparation et la transcription de l’ADN. Le marqueur mCherry sur l’histone H2B produit une fluorescence rouge vif qui contraste avec la fluorescence verte de l’EGFP, permettant ainsi une imagerie double simultanée de la structure nucléaire et de la chromatine lors d’expériences sur des cellules vivantes. Cette lignée cellulaire est couramment utilisée dans les études portant sur la mécanique nucléaire, la mitose et la stabilité du génome, offrant une vision dynamique des processus cellulaires qui sont autrement difficiles à observer en temps réel.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.