HK EGFP-LaminB1/H2B-mCherry

Celična linija HK EGFP-LaminB1/H2B-mCherry je in vitro model Hela Kyoto, zasnovan za vizualizacijo dinamike kromatina in jedrne arhitekture v živih celicah v realnem času. Ta celična linija izraža dve fuziji fluorescenčnih proteinov: EGFP (okrepljeni zeleni fluorescenčni protein), združen z laminom B1, in mCherry (rdeči fluorescenčni protein), združen s histonom H2B. Fuzija EGFP z laminom B1 omogoča opazovanje jedrske ovojnice in jedrske plošče, struktur, ki so ključne za ohranjanje celovitosti in funkcionalnosti jedra. Beljakovine lamina so vmesne filamentne beljakovine tipa V, ki tvorijo mrežo pod notranjo jedrno membrano in imajo ključno vlogo pri stabilnosti jedra, organizaciji kromatina in regulaciji genov.

Po drugi strani pa histon H2B, označen z mCherryjem, omogoča vizualizacijo kromatina v jedru. Histoni so temeljne sestavine nukleosoma, ki sodelujejo pri organizaciji DNK v kromatin, zaradi česar so ključni za replikacijo, popravljanje in transkripcijo DNK. Oznaka mCherry na H2B zagotavlja živo rdečo fluorescenco, ki je v nasprotju z zeleno fluorescenco EGFP, kar omogoča hkratno dvojno slikanje strukture jedra in kromatina v poskusih z živimi celicami. Ta celična linija se pogosto uporablja v študijah, ki se osredotočajo na jedrsko mehaniko, mitozo in stabilnost genoma, saj omogoča dinamičen pogled na celične procese, ki jih je sicer težko opazovati v realnem času.

37 °C, 5 %_CO2, vlažno ozračje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

V podjetju Cytion stojimo za kakovostjo in uporabnostjo svojih izdelkov. Zagotavljamo, da bodo naše celice ob začetku gojenja še 60 dni po odpremi iz naših obratov vitalne. Zagotavljamo, da so vsi materiali skladni s specifikacijami, opisanimi v potrdilu o analizi in/ali listu izdelka

Za vse podrobnosti si oglejte našo <a href=""/Kdo smo/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garancijsko izjavo