Preskoči na vsebino
HK EGFP-H2B
Tkivo
Maternični vrat
Bolezen
Karcinom
Sinonimi
HeLa Kyoto H2B-EGFP, HeLa Kyoto H2B EGFP, HeLa-H2B-GFP

Dokumenti

HK EGFP-H2B

Cell line · Številka izdelka 300673

The HK EGFP-H2B cell line is a genetically modified Hela Kyoto cell line used primarily for the study of chromatin dynamics and nuclear processes. This ce...

€800.00brez davka in stroškov poštnine
Zaloga je majhna
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
1

01Splošne informacije

Opis

Celična linija HK EGFP-H2B je genetsko spremenjena celična linija Hela Kyoto, ki se uporablja predvsem za preučevanje dinamike kromatina in jedrnih procesov. Ta celična linija izraža fuzijski protein, sestavljen iz izboljšanega zelenega fluorescenčnega proteina (EGFP) in histona H2B. Integracija EGFP v beljakovino H2B omogoča vizualizacijo kromatina v živih celicah v realnem času pod fluorescenčnim mikroskopom, kar omogoča dragocen vpogled v prostorsko in časovno organizacijo jedra.

Fuzija EGFP-H2B omogoča številne aplikacije v celični biologiji, vključno s preučevanjem napredovanja celičnega cikla, mitoze in regulacije izražanja genov. Z opazovanjem vzorcev fluorescence lahko raziskovalci ugotavljajo in analizirajo faze celičnega cikla, kromosomsko segregacijo in strukturne spremembe v jedru. Ta celična linija je pridobljena iz odraslih človeških celic, kar zagotavlja, da je pomembna za človeško biologijo, in se uporablja tako v osnovnih bioloških raziskavah kot v bolj uporabnih farmacevtskih študijah.

Poleg tega je celična linija HK EGFP-H2B ključno orodje pri raziskavah epigenetike. Možnost neposrednega opazovanja obnašanja histonov pomaga pri razumevanju epigenetskih mehanizmov, ki so osnova za izražanje in utišanje genov, ter učinkov različnih epigenetskih modifikatorjev. Celična linija je zaradi zanesljive uporabe v poskusih slikanja živih celic nepogrešljiva za podrobne študije, ki zahtevajo dinamično celično analizo.

Tkivo
Maternični vrat
Bolezen
Karcinom
Sinonimi
  • HeLa Kyoto H2B-EGFP
  • HeLa Kyoto H2B EGFP
  • HeLa-H2B-GFP

02Razvrstitev

Organizem
Človek
Seks
Ženska
Lastnosti rasti
Pripadnik
Status GSO
GMO-S1
Podrobnosti o statusu GSO
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-H2B construct allowing real-time visualization of chromatin organization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Morfologija
Epitelnim celicam podobne celice z obliko mozaičnih kamenčkov

04Identifikatorji

Navajanje vira
HK EGFP-H2B (kataloška številka Cytion 300673)
Davčna identifikacijska številka NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1D63
Vlagatelj
Laboratorij Ellenberg (EMBL)

05Izražanje in dovzetnost

Ekspresija beljakovin
EGFP-H2B: Lokacija/gen: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Izdelki
Promotor CMV, histon H2B, neomicin, fosfotransferaza

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
DMEM, w: 4,5 g/L glukoze, w: 4 mM L-glutamina, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natrijevega piruvata (številka izdelka Cytion 820300a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite z 10 % FBS
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Gostota setve
1 x 104 celic/cm2
Obnova tekočine
2 do 3-krat na teden
Obnova po odtaljevanju
Po odmrzovanju celice razporedite na ploščo v gostoti 5 x 104 celic/cm2 in jim pustite, da si opomorejo od zamrzovanja in se prilepijo na ploščo, vsaj 24 ur.
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Starost darovalca
30 let
Etnična pripadnost
Afroameričan