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HK EGFP-H2B
Tissue
Cuello uterino
Disease
Carcinoma
Synonyms
HeLa Kyoto H2B-EGFP, HeLa Kyoto H2B EGFP, HeLa-H2B-GFP

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HK EGFP-H2B

Cell line · Product number 300673

The HK EGFP-H2B cell line is a genetically modified Hela Kyoto cell line used primarily for the study of chromatin dynamics and nuclear processes. This ce...

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1

01General information

Description

La línea celular HK EGFP-H2B es una línea celular Hela Kyoto modificada genéticamente que se utiliza principalmente para el estudio de la dinámica de la cromatina y los procesos nucleares. Esta línea celular expresa una proteína de fusión compuesta por la proteína fluorescente verde mejorada (EGFP) y la histona H2B. La integración de la EGFP en la proteína H2B permite la visualización en tiempo real de la cromatina en células vivas mediante microscopía de fluorescencia, lo que brinda información valiosa sobre la organización espacial y temporal del núcleo.

La fusión EGFP-H2B facilita numerosas aplicaciones en biología celular, incluyendo el estudio de la progresión del ciclo celular, la mitosis y la regulación de la expresión génica. Al observar los patrones de fluorescencia, los investigadores pueden identificar y analizar las fases del ciclo celular, la segregación cromosómica y los cambios estructurales dentro del núcleo. Esta línea celular se deriva de células humanas adultas, lo que garantiza su relevancia para la biología humana, y se utiliza tanto en la investigación biológica básica como en estudios farmacéuticos más aplicados.

Además, la línea celular HK EGFP-H2B sirve como una herramienta crucial en la investigación epigenética. La capacidad de observar directamente el comportamiento de las histonas ayuda a comprender los mecanismos epigenéticos que subyacen a la expresión y el silenciamiento génicos, así como los efectos de diversos modificadores epigenéticos. La sólida aplicación de esta línea celular en experimentos de imágenes de células vivas la convierte en indispensable para estudios detallados que requieren un análisis celular dinámico.

Tissue
Cuello uterino
Disease
Carcinoma
Synonyms
  • HeLa Kyoto H2B-EGFP
  • HeLa Kyoto H2B EGFP
  • HeLa-H2B-GFP

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-H2B construct allowing real-time visualization of chromatin organization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
Células de tipo epitelial con forma de piedra en mosaico

04Identifiers

Citation
HK EGFP-H2B (número de catálogo de Cytion 300673)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_1D63
Depositor
El Laboratorio Ellenberg (EMBL)

05Expression and susceptibility

Protein expression
EGFP-H2B: Ubicación/Gen: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Products
Promotor del CMV, histona H2B, neomicina, fosfotransferasa

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, p/v: 4,5 g/L de glucosa, p/v: 4 mM de L-glutamina, p/v: 3,7 g/L de NaHCO₃, p/v: 1,0 mM de piruvato de sodio (número de artículo de Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

Supplements
Añade al medio un 10 % de FBS
Dissociation reagent
Accutase
Subculturing
Retira el medio usado de las células adheridas y lávalas con PBS sin calcio ni magnesio. Para los frascos T25, usa de 3 a 5 ml de PBS, y para los frascos T75, usa de 5 a 10 ml. Luego, cubra las células por completo con Accutase, utilizando de 1 a 2 ml para los frascos T25 y 2,5 ml para los frascos T75. Deje que las células se incuben a temperatura ambiente durante 8 a 10 minutos para desprenderse. Después de la incubación, mezcla suavemente las células con 10 ml de medio para resuspendarlas; luego, centrifuga a 300xg durante 3 minutos. Deseche el sobrenadante, resuspenda las células en medio fresco y transfiéralas a frascos nuevos que ya contengan medio fresco.
Seeding density
1 x 10⁴ células/cm²
Fluid renewal
De 2 a 3 veces por semana
Post-thaw recovery
Después de descongelarlas, siembre las células a una densidad de 5 × 10⁴ células/cm² y deje que se recuperen del proceso de congelación y se adhieran durante al menos 24 horas.
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Freeze medium
Como medio de criopreservación, utilizamos un medio de crecimiento completo (que incluye FBS) + 10 % de DMSO para garantizar una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo de Cytion 800100), que incluye osmoprotectores y estabilizadores metabólicos optimizados para mejorar la recuperación y reducir el estrés inducido por la criopreservación.
Storage conditions

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Shipping conditions

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

08Donor

Donor age
30 años
Ethnicity
Afroamericano