Gå til innholdet
HK EGFP-H2B
Vev
Livmorhalsen
Sykdom
Karsinom
Synonymer
HeLa Kyoto H2B-EGFP, HeLa Kyoto H2B EGFP, HeLa-H2B-GFP

Dokumenter

HK EGFP-H2B

Cell line · Produktnummer 300673

The HK EGFP-H2B cell line is a genetically modified Hela Kyoto cell line used primarily for the study of chromatin dynamics and nuclear processes. This ce...

€800.00ekskl. mva. og frakt
Lite på lager
Lot
Anbefalt (det ferskeste partiet)
1

01Generell informasjon

Beskrivelse

HK EGFP-H2B-cellelinjen er en genmodifisert Hela Kyoto-cellelinje som primært brukes til studier av kromatindynamikk og kjerneprosesser. Denne cellelinjen uttrykker et fusjonsprotein bestående av Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) og histon H2B. Integrasjonen av EGFP i H2B-proteinet gjør det mulig å visualisere kromatin i levende celler i sanntid under fluorescensmikroskopi, noe som gir verdifull innsikt i den romlige og tidsmessige organiseringen av kjernen.

EGFP-H2B-fusjonen muliggjør en rekke anvendelser innen cellebiologi, blant annet studier av cellesyklusprogresjon, mitose og regulering av genuttrykk. Ved å observere fluorescensmønstrene kan forskere identifisere og analysere faser i cellesyklusen, kromosomsegregering og strukturelle endringer i kjernen. Denne cellelinjen er avledet fra voksne humane celler, noe som sikrer relevansen for humanbiologi, og den brukes både i biologisk grunnforskning og mer anvendte farmasøytiske studier.

I tillegg er HK EGFP-H2B-cellelinjen et viktig verktøy i epigenetisk forskning. Muligheten til å observere histonatferd direkte bidrar til å forstå de epigenetiske mekanismene som ligger til grunn for genuttrykk og avstenging, samt effekten av ulike epigenetiske modifikatorer. Cellelinjens robuste anvendelse i live-celleavbildningseksperimenter gjør den uunnværlig for detaljerte studier som krever dynamisk celleanalyse.

Vev
Livmorhalsen
Sykdom
Karsinom
Synonymer
  • HeLa Kyoto H2B-EGFP
  • HeLa Kyoto H2B EGFP
  • HeLa-H2B-GFP

02Klassifisering

Organisme
Menneske
Sex
Kvinne
Vekstegenskaper
Tilhenger
GMO-status
GMO-S1
Detaljer om GMO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-H2B construct allowing real-time visualization of chromatin organization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosikkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Epitel-lignende celler med mosaikksteinform

04Identifikatorer

Kildehenvisning
HK EGFP-H2B (Cytion katalognummer 300673)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_1D63
Innskjærer
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Uttrykk og mottakelighet

Proteinekspresjon
EGFP-H2B: Beliggenhet/Gen: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produkter
CMV-promotor, histon H2B, neomycin, fosfotransferase

06Håndtering og kultur

Næringsmedium
DMEM, m: 4,5 g/L glukose, m: 4 mM L-glutamin, m: 3,7 g/L NaHCO3, m: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikkelnummer 820300a)
Inkubasjonsatmosfære

37 °C, 5 %CO2, befuktet atmosfære.

Kosttilskudd
Suppler mediet med 10 % FBS
Dissosiasjonsmiddel
Accutase
Subkultivering
Fjern det gamle mediet fra de adherente cellene, og vask dem med PBS uten kalsium og magnesium. Bruk 3-5 ml PBS for T25-kolber og 5-10 ml for T75-kolber. Dekk deretter cellene helt med Accutase, med 1-2 ml for T25-kolber og 2,5 ml for T75-kolber. La cellene inkubere i romtemperatur i 8-10 minutter for å løsne dem. Etter inkubasjon blandes cellene forsiktig med 10 ml medium for å resuspendere dem, og sentrifuger deretter ved 300xg i 3 minutter. Kast supernatanten, resuspender cellene i nytt medium, og overfør dem til nye kolber som allerede inneholder nytt medium.
Såtetthet
1 x 104 celler/cm2
Væskefornyelse
2 til 3 ganger per uke
Gjenoppretting etter tining
Etter tining, plasser cellene på 5 x 104 celler/cm2 og la cellene komme seg etter fryseprosessen og feste seg i minst 24 timer.
Tining og dyrking
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll og kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

Frysemedium
Som kryopreserveringsmedium bruker vi komplett vekstmedium (inkludert FBS) + 10 % DMSO for tilstrekkelig levedyktighet etter opptining, eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som inneholder optimaliserte osmobeskyttende midler og metabolske stabilisatorer for å øke utvinningen og redusere kryoindusert stress.
Oppbevaringsbetingelser

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Fraktvilkår

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

08Donor

Donorens alder
30 år
Etnisitet
Afroamerikaner