HK EGFP-alfa-tubulin/H2B-mCherry

HK EGFP-alfa-tubulin/H2B-mCherry HeLa Kyoto-cellelinjen er en omhyggelig konstruert modell som er designet for detaljert visualisering av cellulære prosesser. Denne klonale linjen er stabilt transfektert for å uttrykke to fluorescerende proteinfusjoner som muliggjør sanntidsavbildning av både kromatin og det mikrotubulære nettverket. Det røde fluorescerende proteinet mCherry er fusjonert med kjernehistonproteinet H2B, noe som gir H2B-mCherry. Dette fusjonsproteinet uttrykkes fra pH2B-mCherry-IRES-neo3-plasmidet og fungerer som en kromatinmarkør som fremhever kjerne-DNA i levende celleavbildning og muliggjør studier av kromatindynamikk og kjernearkitektur.

I tillegg uttrykker denne cellelinjen monomert GFP (Green Fluorescent Protein) fusjonert til α-tubulin, introdusert via pmEGFP-α-tubulin-IRES-puro2b-plasmidet. GFP-α-tubulin-fusjonen gir en levende grønn fluorescens som skisserer mikrotubuli-strukturene i cellen. Denne egenskapen er avgjørende for å studere mikrotubuliorganisering, dynamikk og deres rolle i celledeling og intracellulær transport. Den stabile integrasjonen av disse konstruksjonene muliggjør kontinuerlig, langsiktig observasjon av disse cellulære komponentene uten behov for gjentatt transfeksjon, noe som reduserer variabiliteten og øker påliteligheten til de eksperimentelle resultatene. Seleksjon av legemiddelresistens etter transfeksjon sikrer stabilitet og ensartet uttrykk blant cellene i denne linjen.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring