HK EGFP-alfa-tubulina/H2B-mCherry

La linea cellulare HK EGFP-alfa-tubulina/H2B-mCherry HeLa Kyoto è un modello meticolosamente progettato per la visualizzazione dettagliata dei processi cellulari. Questa linea clonale è stata trasfettata in modo stabile per esprimere due fusioni di proteine fluorescenti che consentono di visualizzare in tempo reale sia la cromatina che la rete microtubulare. La proteina fluorescente rossa mCherry è fusa con la proteina istone H2B, creando H2B-mCherry. Questa proteina di fusione è espressa dal plasmide pH2B-mCherry-IRES-neo3 e serve come marcatore della cromatina, evidenziando il DNA nucleare nell'imaging delle cellule vive e facilitando gli studi sulla dinamica della cromatina e sull'architettura nucleare.

Inoltre, questa linea cellulare esprime GFP (Green Fluorescent Protein) monomerica potenziata fusa con α-tubulina, introdotta tramite il plasmide pmEGFP-α-tubulina-IRES-puro2b. La fusione GFP-α-tubulina fornisce una fluorescenza verde vivida che delinea le strutture dei microtubuli all'interno della cellula. Questa caratteristica è fondamentale per studiare l'organizzazione e la dinamica dei microtubuli e il loro ruolo nella divisione cellulare e nel trasporto intracellulare. L'integrazione stabile di questi costrutti consente un'osservazione continua e a lungo termine di questi componenti cellulari senza la necessità di ripetere la trasfezione, riducendo così la variabilità e migliorando l'affidabilità dei risultati sperimentali. La selezione della resistenza ai farmaci dopo la trasfezione assicura la stabilità e l'uniformità dell'espressione tra le cellule di questa linea.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia