HK EGFP-alpha-tubulin/H2B-mCherry

La línea celular HeLa Kyoto HK EGFP-alfa-tubulina/H2B-mCherry es un modelo diseñado meticulosamente para la visualización detallada de los procesos celulares. Esta línea clonal ha sido transfectada de manera estable para expresar dos fusiones de proteínas fluorescentes que permiten la obtención de imágenes en tiempo real tanto de la cromatina como de la red de microtúbulos. La proteína fluorescente roja mCherry se fusiona con la proteína histona central H2B, creando H2B-mCherry. Esta proteína de fusión se expresa a partir del plásmido pH2B-mCherry-IRES-neo3 y sirve como marcador de la cromatina, resaltando el ADN nuclear en imágenes de células vivas y facilitando los estudios sobre la dinámica de la cromatina y la arquitectura nuclear.

Además, esta línea celular expresa GFP (proteína fluorescente verde) monomérica mejorada fusionada con α-tubulina, introducida a través del plásmido pmEGFP-α-tubulina-IRES-puro2b. La fusión GFP-α-tubulina proporciona una fluorescencia verde intensa que delinea las estructuras de los microtúbulos dentro de la célula. Esta característica es crucial para estudiar la organización y la dinámica de los microtúbulos, así como su papel en la división celular y el transporte intracelular. La integración estable de estos constructos permite la observación continua y a largo plazo de estos componentes celulares sin necesidad de transfecciones repetidas, lo que reduce la variabilidad y mejora la confiabilidad de los resultados experimentales. La selección por resistencia a fármacos tras la transfección garantiza la estabilidad y la uniformidad de la expresión entre las células de esta línea.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.