HK EGFP-alfa-tubulín/H2B-mCherry

Bunková línia HK EGFP-alfa-tubulín/H2B-mCherry HeLa Kyoto je starostlivo navrhnutý model určený na podrobnú vizualizáciu bunkových procesov. Táto klonálna línia bola stabilne transfekovaná na expresiu dvoch fluorescenčných proteínových fúzií, ktoré umožňujú zobrazovanie chromatínu a mikrotubulárnej siete v reálnom čase. Červený fluorescenčný proteín mCherry sa spája s hlavným histónovým proteínom H2B, čím vzniká H2B-mCherry. Tento fúzny proteín sa exprimuje z plazmidu pH2B-mCherry-IRES-neo3 a slúži ako chromatínový marker, ktorý zvýrazňuje jadrovú DNA pri zobrazovaní živých buniek a uľahčuje štúdie dynamiky chromatínu a jadrovej architektúry.

Okrem toho táto bunková línia exprimuje monomérny zosilnený GFP (zelený fluorescenčný proteín) fúzovaný s α-tubulínom, ktorý sa zavádza prostredníctvom plazmidu pmEGFP-α-tubulín-IRES-puro2b. Fúzia GFP-α-tubulínu poskytuje žiarivú zelenú fluorescenciu, ktorá obkresľuje mikrotubulárne štruktúry v bunke. Táto vlastnosť je kľúčová pre štúdium organizácie mikrotubulov, ich dynamiky a úlohy pri delení buniek a vnútrobunkovom transporte. Stabilná integrácia týchto konštruktov umožňuje nepretržité, dlhodobé pozorovanie týchto bunkových zložiek bez potreby opakovanej transfekcie, čím sa znižuje variabilita a zvyšuje spoľahlivosť experimentálnych výsledkov. Selekcia liekovej rezistencie po transfekcii zabezpečuje stabilitu a jednotnosť expresie medzi bunkami tejto línie.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

V spoločnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopnosťou našich produktov. Garantujeme, že naše bunky budú životaschopné na začiatku kultivácie počas 60 dní po odoslaní z našich zariadení. Zaručujeme, že všetky materiály zodpovedajú špecifikáciám opísaným v certifikáte analýzy a/alebo v produktovom liste

Úplné informácie nájdete v našom <a href=""/Kto sme/záruka/"" hreflang=""x-default"">Vyhlásení o záruke