HK EGFP-alfa-tubulin/H2B-mCherry

HK EGFP-alfa-tubulin/H2B-mCherry HeLa Kyoto-cellinjen är en noggrant konstruerad modell som är utformad för detaljerad visualisering av cellulära processer. Denna klonala linje har transfekterats stabilt för att uttrycka två fluorescerande proteinfusioner som möjliggör realtidsavbildning av både kromatin och det mikrotubulära nätverket. Det röda fluorescerande proteinet mCherry är fusionerat med kärnhistonproteinet H2B, vilket ger H2B-mCherry. Detta fusionsprotein uttrycks från plasmiden pH2B-mCherry-IRES-neo3 och fungerar som en kromatinmarkör, som framhäver kärn-DNA i live-cellavbildning och underlättar studier av kromatindynamik och kärnarkitektur.

Dessutom uttrycker denna cellinje monomer förstärkt GFP (Green Fluorescent Protein) fusionerat med α-tubulin, introducerat via pmEGFP-α-tubulin-IRES-puro2b-plasmiden. GFP-α-tubulinfusionen ger en livlig grön fluorescens som beskriver mikrotubulistrukturerna i cellen. Denna funktion är avgörande för att studera mikrotubulernas organisation och dynamik samt deras roll i celldelning och intracellulär transport. Den stabila integrationen av dessa konstruktioner möjliggör kontinuerlig och långsiktig observation av dessa cellulära komponenter utan behov av upprepad transfektion, vilket minskar variabiliteten och ökar tillförlitligheten i experimentresultaten. Val av läkemedelsresistens efter transfektion säkerställer stabilitet och enhetlighet i uttrycket bland cellerna i denna linje.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring