HK EGFP-alpha-tubulin/H2B-mCherry

La lignée cellulaire HeLa Kyoto HK EGFP-alpha-tubuline/H2B-mCherry est un modèle méticuleusement conçu pour permettre une visualisation détaillée des processus cellulaires. Cette lignée clonale a été transfectée de manière stable afin d’exprimer deux fusions de protéines fluorescentes qui permettent l’imagerie en temps réel tant de la chromatine que du réseau microtubulaire. La protéine fluorescente rouge mCherry est fusionnée à la protéine histone centrale H2B, créant ainsi la protéine H2B-mCherry. Cette protéine de fusion est exprimée à partir du plasmide pH2B-mCherry-IRES-neo3 et sert de marqueur de la chromatine, mettant en évidence l’ADN nucléaire lors de l’imagerie de cellules vivantes et facilitant les études sur la dynamique de la chromatine et l’architecture nucléaire.

De plus, cette lignée cellulaire exprime une GFP (protéine fluorescente verte) monomérique renforcée fusionnée à l’α-tubuline, introduite par le plasmide pmEGFP-α-tubuline-IRES-puro2b. La fusion GFP-α-tubuline produit une fluorescence verte vive qui met en évidence les structures des microtubules à l’intérieur de la cellule. Cette caractéristique est essentielle pour l’étude de l’organisation et de la dynamique des microtubules, ainsi que de leur rôle dans la division cellulaire et le transport intracellulaire. L’intégration stable de ces constructions permet une observation continue et à long terme de ces composants cellulaires sans qu’il soit nécessaire de procéder à des transfections répétées, ce qui réduit la variabilité et améliore la fiabilité des résultats expérimentaux. La sélection par résistance aux médicaments après la transfection garantit la stabilité et l’uniformité de l’expression parmi les cellules de cette lignée.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.