HK EGFP-alfa-tubulin/H2B-mCherry

HK EGFP-alpha-tubulin/H2B-mCherry HeLa Kyoto-cellelinjen er en omhyggeligt konstrueret model, der er designet til detaljeret visualisering af cellulære processer. Denne klonale linje er blevet stabilt transfekteret til at udtrykke to fluorescerende proteinfusioner, der muliggør realtidsafbildning af både kromatin og det mikrotubulære netværk. Det røde fluorescerende protein mCherry er fusioneret med kernehistonproteinet H2B, hvilket skaber H2B-mCherry. Dette fusionsprotein udtrykkes fra pH2B-mCherry-IRES-neo3-plasmidet og fungerer som en kromatinmarkør, der fremhæver det nukleare DNA i live-cellebilleder og letter undersøgelser af kromatin-dynamik og nuklear arkitektur.

Derudover udtrykker denne cellelinje monomert forbedret GFP (grønt fluorescerende protein) fusioneret til α-tubulin, introduceret via pmEGFP-α-tubulin-IRES-puro2b-plasmidet. GFP-α-tubulin-fusionen giver en levende grøn fluorescens, der skitserer mikrotubuli-strukturerne i cellen. Denne funktion er afgørende for at studere mikrotubuli-organisation, dynamik og deres rolle i celledeling og intracellulær transport. Den stabile integration af disse konstruktioner giver mulighed for kontinuerlig, langsigtet observation af disse cellulære komponenter uden behov for gentagen transfektion, hvilket reducerer variabiliteten og forbedrer pålideligheden af eksperimentelle resultater. Selektion af lægemiddelresistens efter transfektion sikrer stabilitet og ensartethed i udtrykket blandt cellerne i denne linje.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring