Gå direkte til indholdet
HK EGFP-Kleisin-beta
Væv
Livmoderhalsen
Sygdom
Karcinom
Synonymer
HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b, HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP

Dokumenter

HK EGFP-Kleisin-beta

Cell line · Varenummer 300674

The HK EGFP-Kleisin-beta cell line represents a genetically modified variant of Hela Kyoto cells designed primarily for the study of chromosome cohesion d...

€800.00ekskl. moms og fragt
På lager
Lot
Anbefalet (det nyeste parti)
1

01Generelle oplysninger

Beskrivelse

HK EGFP-Kleisin-beta-cellelinjen repræsenterer en genetisk modificeret variant af Hela Kyoto-celler, der primært er designet til undersøgelse af kromosomkohæsion under cellecyklussen. Denne cellelinje udtrykker et forstærket grønt fluorescerende protein (EGFP), der er fusioneret med Kleisin-beta-proteinet, en afgørende komponent i cohesin-komplekset, der er afgørende for søsterkromatid-kohæsion. Udtrykket af EGFP-mærket Kleisin-beta giver mulighed for realtidsvisualisering af kohesindynamik og lokalisering gennem hele cellecyklussen, hvilket letter detaljerede analyser af kromosomstruktur og -funktion i en cellulær kontekst.

Denne cellemodel bruges typisk i forskning med fokus på mekanismerne for mitotisk og meiotisk kromosomadskillelse, hvor man især ser på, hvordan cohesins regulering påvirker den genetiske stabilitet og celledelingen. Den fluorescerende mærkning af Kleisin-beta gør det muligt at undersøge dens interaktion med andre cohesin-komponenter og kromosomproteiner, hvilket giver indsigt i den rumlige og tidsmæssige samling af cohesin på kromosomer. Brugen af denne cellelinje strækker sig til undersøgelser af genetiske lidelser og kræftformer, hvor cohesin-funktionen er forstyrret, hvilket giver et værdifuldt værktøj til at forstå patogenesen og udvikle terapeutiske strategier.

Væv
Livmoderhalsen
Sygdom
Karcinom
Synonymer
  • HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b
  • HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP

02Klassificering

Organisme
Menneske
Køn
Kvinde
Vækstegenskaber
Tilhænger
GMO-status
GMO-S1
Oplysninger om GMO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-kleisin-beta construct for live-cell studies of cohesin and chromosome architecture. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosikkerhedsniveau
1

03Egenskaber

Morfologi
Epithel-lignende celler med mosaikstenform

04Identifikatorer

Kildehenvisning
HK EGFP-Kleisin-beta (Cytion katalognummer 300674)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_1D64
Indskyder
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Udtryk og modtagelighed

Proteinekspression
EGFP-Kleisin-β: Placering/gen: 1..589 / Pcmv, 619..645 / Flag-tag, 661..1368 / GFP, 1393..3206 / Kleisin Beta, 4474..5268 KanR/NeoR

06Håndtering og opdræt

Næringsmedium
DMEM, w: 4,5 g/L glukose, w: 4 mM L-glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosfære

37°C, 5%CO2, befugtet atmosfære.

Kosttilskud
Suppler mediet med 10% FBS
Dissociationsreagens
Accutase
Oddyrkning
Fjern det gamle medium fra de klæbende celler, og vask dem med PBS, der ikke indeholder calcium og magnesium. Brug 3-5 ml PBS til T25-kolber og 5-10 ml til T75-kolber. Dæk derefter cellerne helt med Accutase, brug 1-2 ml til T25-kolber og 2,5 ml til T75-kolber. Lad cellerne inkubere ved stuetemperatur i 8-10 minutter for at løsne dem. Efter inkubationen blandes cellerne forsigtigt med 10 ml medium for at resuspendere dem, og centrifugeres derefter ved 300xg i 3 minutter. Kassér supernatanten, resuspender cellerne i frisk medium, og overfør dem til nye kolber, der allerede indeholder frisk medium.
Såtæthed
1 x 104 celler/cm2
Væskeudskiftning
2 til 3 gange om ugen
Genopretning efter optøning
Efter optøning skal cellerne udplades med 5 x 104 celler/cm2, og cellerne skal have lov til at komme sig efter frysningsprocessen og hæfte sig fast i mindst 24 timer.
Optøning og dyrkning
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontrol og kryopræservering

Sterilitet

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

Frysemedium
Som kryopræserveringsmedium bruger vi komplet vækstmedium (inklusive FBS) + 10 % DMSO for tilstrækkelig levedygtighed efter optøning eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som indeholder optimerede osmobeskyttende stoffer og metaboliske stabilisatorer for at forbedre genopretningen og reducere kryo-induceret stress.
Opbevaringsbetingelser

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Leveringsbetingelser

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

08Donor

Donorens alder
30 år
Etnisk tilhørsforhold
Afroamerikaner