Tartalomra ugrás
HK EGFP-Kleisin-beta
Szövet
Cervix
Betegség
Karcinóma
Szinonimák
HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b, HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP

Dokumentumok

HK EGFP-Kleisin-beta

Cell line · Termékszám 300674

The HK EGFP-Kleisin-beta cell line represents a genetically modified variant of Hela Kyoto cells designed primarily for the study of chromosome cohesion d...

€800.00adó és szállítási költség nélkül
Raktáron van
Lot
Ajánlott (a legfrissebb tétel)
1

01Általános információk

Leírás

A HK EGFP-Kleisin-béta sejtvonal a Hela Kyoto sejtek genetikailag módosított változata, amelyet elsősorban a kromoszómák sejtciklus alatti kohéziójának tanulmányozására terveztek. Ez a sejtvonal egy fokozottan zöld fluoreszcens fehérjét (EGFP) expresszál, amelyet a Kleisin-béta fehérjével fuzionáltak, amely a kromatidák kohéziójához nélkülözhetetlen kohézin komplex egyik fontos összetevője. Az EGFP-vel jelölt Kleisin-béta expressziója lehetővé teszi a koheszin dinamikájának és lokalizációjának valós idejű vizualizálását a sejtciklus során, megkönnyítve a kromoszóma szerkezetének és működésének részletes elemzését sejtkörnyezetben.

Ezt a sejtmodellt jellemzően a mitotikus és meiotikus kromoszómaszegregáció mechanizmusaira összpontosító kutatások során használják, különösen azt vizsgálva, hogy a koheszin szabályozása hogyan befolyásolja a genetikai stabilitást és a sejtosztódást. A Kleisin-béta fluoreszcens jelölése lehetővé teszi más kohézin komponensekkel és kromoszómális fehérjékkel való kölcsönhatásának vizsgálatát, betekintést nyújtva a kohézin kromoszómákon való térbeli és időbeli összeszerelődésébe. Ennek a sejtvonalnak a felhasználása kiterjed az olyan genetikai rendellenességek és rákos megbetegedések vizsgálatára, ahol a koheszin működése megzavarodott, értékes eszközt kínálva a patogenezis megértéséhez és terápiás stratégiák kifejlesztéséhez.

Szövet
Cervix
Betegség
Karcinóma
Szinonimák
  • HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b
  • HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP

02Osztályozás

Organizmus
Ember
Szex
Nő
Növekedési tulajdonságok
Hűséges
GMO-státusz
GMO-S1
A GMO-státuszra vonatkozó részletek
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-kleisin-beta construct for live-cell studies of cohesin and chromosome architecture. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biológiai biztonsági szint
1

03Jellemzők

Morfológia
Epithelszerű, mozaikos kő alakú sejtek

04Azonosítók

Hivatkozás
HK EGFP-Kleisin-béta (Cytion katalógusszám: 300674)
NCBI adóazonosító szám
9606
Cellosaurus
CVCL_1D64
Betétes
Az Ellenberg Labor (EMBL)

05Kifejeződés és fogékonyság

Fehérjeexpresszió
EGFP-Kleisin-β: 589 / Pcmv, 619..645 / Flag-tag, 661..1368 / GFP, 1393..3206 / Kleisin-Béta, 4474..5268 KanR/NeoR

06Kezelés és tenyésztés

Táptalaj
DMEM, w: 4,5 g/L glükóz, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM nátrium-piruvát (Cytion cikkszám 820300a)
Inkubációs környezet

37°C, 5%CO2, párásított légkör.

Kiegészítők
A táptalajt egészítsük ki 10% FBS-szel
Diszociációs reagens
Accutase
Átültetés
Távolítsa el a régi táptalajt a megtapadt sejtekről, és mossa őket kalcium- és magnéziummentes PBS-szel. T25-ös lombikokhoz 3-5 ml PBS-t, T75-ös lombikokhoz pedig 5-10 ml-t használjunk. Ezután fedjük be a sejteket teljesen Accutase-zal, T25 lombikok esetében 1-2 ml-t, T75 lombikok esetében 2,5 ml-t használva. A sejteket 8-10 percig hagyjuk szobahőmérsékleten inkubálni, hogy leváljanak. Az inkubálás után óvatosan keverjük össze a sejteket 10 ml tápfolyadékkal, hogy reszuszpendáljuk őket, majd centrifugáljuk 300xg-nél 3 percig. Dobja el a felülúszót, szuszpendálja újra a sejteket friss tápfolyadékban, és helyezze át őket új lombikokba, amelyek már friss tápfolyadékot tartalmaznak.
Ültetési sűrűség
1 x 104 sejt/cm2
Folyadékcsere
hetente 2-3 alkalommal
Az olvadás utáni helyreállás
Felolvasztás után helyezze a sejteket 5 x 104 sejt/cm2 sűrűséggel lemezre, és hagyja, hogy a sejtek felolvadjanak és legalább 24 órán át tapadjanak.
Felolvasztás és tenyésztés
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Minőségellenőrzés és kriokonzerválás

Meddőség

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Fagyasztóközeg
Krioprezerváló táptalajként teljes növekedési táptalajt (beleértve az FBS-t) + 10% DMSO-t használunk a megfelelő kiolvasztás utáni életképesség érdekében, vagy CM-1-et (Cytion katalógusszám: 800100), amely optimalizált ozmoprotektánsokat és metabolikus stabilizátorokat tartalmaz a regenerálódás fokozása és a krio-indukált stressz csökkentése érdekében.
Tárolási feltételek

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

Szállítási feltételek

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

08Adományozó

Az adományozó életkora
30 év
Etnikai hovatartozás
Afroamerikai