Перейти до вмісту
HK EGFP-Kleisin-beta
Тканина
Шийка матки
Хвороба
Карцинома
Синоніми
HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b, HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP

Документи

HK EGFP-Kleisin-beta

Cell line · Номер товару 300674

The HK EGFP-Kleisin-beta cell line represents a genetically modified variant of Hela Kyoto cells designed primarily for the study of chromosome cohesion d...

€800.00без урахування податків та вартості доставки
Є в наявності
Лот
Рекомендовано (найсвіжіша партія)
1

01Загальна інформація

Опис

Клітинна лінія HK EGFP-Kleisin-beta являє собою генетично модифікований варіант клітин Hela Kyoto, розроблений в першу чергу для вивчення когезії хромосом протягом клітинного циклу. Ця клітинна лінія експресує посилений зелений флуоресцентний білок (EGFP), злитий з білком Kleisin-beta, ключовим компонентом комплексу когезину, який є життєво важливим для зчеплення сестринських хроматид. Експресія EGFP-міченого Kleisin-beta дозволяє візуалізувати динаміку та локалізацію когезину в реальному часі протягом клітинного циклу, що полегшує детальний аналіз структури та функції хромосом у клітинному контексті.

Ця клітинна модель зазвичай використовується в дослідженнях, що фокусуються на механізмах мітотичної та мейотичної сегрегації хромосом, зокрема, на вивченні впливу регуляції когезину на генетичну стабільність і поділ клітин. Флуоресцентне мічення Kleisin-beta дозволяє досліджувати його взаємодію з іншими компонентами когезину та хромосомними білками, що дає уявлення про просторову та часову збірку когезину на хромосомах. Використання цієї клітинної лінії поширюється на дослідження генетичних розладів і раку, де функція когезину порушена, пропонуючи цінний інструмент для розуміння патогенезу і розробки терапевтичних стратегій.

Тканина
Шийка матки
Хвороба
Карцинома
Синоніми
  • HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b
  • HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP

02Класифікація

Організм
Людина
Секс
Жінка
Характеристики росту
Прихильник
Статус ГМО
GMO-S1
Детальна інформація щодо статусу ГМО
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-kleisin-beta construct for live-cell studies of cohesin and chromosome architecture. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Рівень біобезпеки
1

03Характеристики

Морфологія
Епітеліоподібні клітини з формою мозаїчного каменю

04Ідентифікатори

Посилання
HK EGFP-Kleisin-beta (номер за каталогом Cytion 300674)
Ідентифікаційний номер платника податків NCBI
9606
Целозавр
CVCL_1D64
Вкладник
Лабораторія Елленберга (EMBL)

05Експресія та сприйнятливість

Експресія білків
EGFP-Kleisin-β: Розташування/ген: 1..589 / Pcmv, 619.645 / Flag-tag, 661.1368 / GFP, 1393.3206 / Kleisin Beta, 4474.5268 KanR/NeoR

06Обробка та вирощування

Живильне середовище
ДМЕМ, w: 4,5 г/л Глюкоза, w: 4 мМ L-глутамін, w: 3,7 г/л NaHCO3, w: 1,0 мМ піруват натрію (цит. номер 820300a)
Атмосфера інкубації

37°C, 5% CO2, волога атмосфера.

Добавки
Додайте до середовища 10% FBS
Реагент для дисоціації
Аккутаза
Пересадка в нове середовище
Видаліть старе середовище з прилиплих клітин і промийте їх PBS, в якому бракує кальцію і магнію. Для колб T25 використовуйте 3-5 мл PBS, а для колб T75 - 5-10 мл. Потім повністю покрийте клітини аккутазою, використовуючи 1-2 мл для колб Т25 і 2,5 мл для колб Т75. Залиште клітини інкубуватися при кімнатній температурі протягом 8-10 хвилин, щоб відокремити їх. Після інкубації обережно змішайте клітини з 10 мл середовища, щоб ресуспендувати їх, а потім центрифугуйте при 300xg протягом 3 хвилин. Викиньте надосадову рідину, ресуспендуйте клітини у свіжому середовищі та перенесіть їх у нові колби, які вже містять свіже середовище.
Щільність висіву
1 x 104 клітин/см2
Оновлення рідини
2-3 рази на тиждень
Відновлення після відлиги
Після розморожування висійте клітини з щільністю 5 x 104 клітин/см2 і дайте клітинам відновитися після процесу заморожування та прикріпитися протягом щонайменше 24 годин.
Розморожування та культивування
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Контроль якості та кріоконсервація

Стерильність

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Середовище для заморожування
Як середовище кріоконсервування ми використовуємо повне живильне середовище (включаючи FBS) + 10% ДМСО для адекватної життєздатності після відтавання або CM-1 (номер за каталогом Cytion 800100), до складу якого входять оптимізовані осмопротектори та метаболічні стабілізатори для прискорення відновлення та зменшення кріоіндукованого стресу.
Умови зберігання

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Умови доставки

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

08Донор

Вік донора
30 років
Етнічна приналежність
Афроамериканець