
- Tissue
- ปากมดลูก
- Disease
- มะเร็งชนิดคาร์ซินอมา
- Synonyms
- HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b, HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP
Documents
HK EGFP-Kleisin-beta
Cell line · Product number 300674
The HK EGFP-Kleisin-beta cell line represents a genetically modified variant of Hela Kyoto cells designed primarily for the study of chromosome cohesion d...
Customization / Recommendations
- HK EGFP-Kleisin-betaCell line€800.00
Recommended (freshest lot)
01General information
- Description
สายเซลล์ HK EGFP-Kleisin-beta เป็นสายเซลล์ที่ถูกดัดแปลงพันธุกรรมจากเซลล์ Hela Kyoto ซึ่งถูกออกแบบมาเพื่อการศึกษาการยึดเกาะของโครโมโซมในระหว่างรอบการแบ่งเซลล์ สายเซลล์นี้แสดงโปรตีนเรืองแสงสีเขียวที่เพิ่มประสิทธิภาพ (EGFP) ที่ถูกเชื่อมต่อกับโปรตีน Kleisin-beta ซึ่งเป็นส่วนประกอบสำคัญของคอมเพล็กซ์ cohesin ที่มีความสำคัญต่อการยึดเกาะของโครมาทิดพี่น้องการแสดงออกของ Kleisin-beta ที่ติดฉลากด้วย EGFP ช่วยให้สามารถมองเห็นพลวัตและการกระจายตัวของ cohesin แบบเรียลไทม์ตลอดทั้งวัฏจักรของเซลล์ ซึ่งเอื้อต่อการวิเคราะห์โครงสร้างและหน้าที่ของโครโมโซมในบริบทของเซลล์ได้อย่างละเอียด
แบบจำลองเซลล์นี้มักถูกใช้ในงานวิจัยที่มุ่งเน้นกลไกการแบ่งแยกโครโมโซมในกระบวนการไมโทซิสและไมโอซิส โดยเฉพาะการศึกษาว่า การควบคุมของโคเอซินมีอิทธิพลต่อความเสถียรทางพันธุกรรมและการแบ่งเซลล์อย่างไรการติดแท็กด้วยสารเรืองแสงของ Kleisin-beta ช่วยให้สามารถศึกษาการปฏิสัมพันธ์ของมันกับส่วนประกอบอื่นๆ ของโคเอซินและโปรตีนในโครโมโซมได้ ซึ่งให้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับการประกอบกันในเชิงพื้นที่และเวลาของโคเอซินบนโครโมโซม การใช้สายเซลล์นี้ยังขยายไปถึงการศึกษาความผิดปกติทางพันธุกรรมและมะเร็งที่มีการรบกวนการทำงานของโคเอซิน ซึ่งเป็นเครื่องมือที่มีคุณค่าในการทำความเข้าใจพยาธิกำเนิดและพัฒนากลยุทธ์การรักษา
- Tissue
- ปากมดลูก
- Disease
- มะเร็งชนิดคาร์ซินอมา
- Synonyms
- HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b
- HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Female
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- GMO-S1
- GMO status details
- GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-kleisin-beta construct for live-cell studies of cohesin and chromosome architecture. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- เซลล์คล้ายเยื่อบุผิวที่มีรูปร่างเป็นหินแบบโมเสก
04Identifiers
- Citation
- HK EGFP-Kleisin-beta (Catalog หมายเลข 300674 ของ Cytion)
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_1D64
- Depositor
- ห้องปฏิบัติการเอลเลนเบิร์ก (EMBL)
05Expression and susceptibility
- Protein expression
- EGFP-Kleisin-β: ตำแหน่ง/ยีน: 1..589 / Pcmv, 619..645 / Flag-tag, 661..1368 / GFP, 1393..3206 / Kleisin Beta, 4474..5268 KanR/NeoR
06Handling and culture
- Culture medium
- DMEM, w: 4.5 กรัม/ลิตร กลูโคส, w: 4 มิลลิโมลาร์ แอล-กลูตามีน, w: 3.7 กรัม/ลิตร NaHCO3, w: 1.0 มิลลิโมลาร์ โซเดียมไพรูเวต (หมายเลขบทความ Cytion 820300a)
- Incubation atmosphere
37°C, 5%CO2, บรรยากาศชื้น
- Supplements
- เติมอาหารเลี้ยงเชื้อด้วย FBS 10%
- Dissociation reagent
- แอคคูเทส
- Subculturing
- นำอาหารเลี้ยงเซลล์เก่าออกจากเซลล์ที่เกาะติดและล้างด้วย PBS ที่ไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียม สำหรับขวด T25 ให้ใช้ PBS 3-5 มล. และสำหรับขวด T75 ให้ใช้ 5-10 มล. จากนั้นปิดเซลล์ให้มิดด้วย Accutase โดยใช้ 1-2 มล. สำหรับขวด T25 และ 2.5 มล. สำหรับขวด T75ปล่อยให้เซลล์บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 8-10 นาทีเพื่อให้เซลล์หลุดออกจากกัน หลังจากบ่มแล้ว ให้ผสมเซลล์เบา ๆ กับอาหารเลี้ยงเซลล์ 10 มิลลิลิตรเพื่อทำให้เซลล์แขวนลอยอีกครั้ง จากนั้นปั่นเหวี่ยงที่ 300 เท่าของแรงโน้มถ่วงโลก (300xg) เป็นเวลา 3 นาที เทส่วนใสที่ได้ทิ้งไป แล้วแขวนลอยเซลล์ในอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ จากนั้นถ่ายเซลล์ไปยังขวดเพาะเลี้ยงใหม่ที่เติมอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ไว้แล้ว
- Seeding density
- 1 x 10^4 เซลล์/ซม.^2
- Fluid renewal
- 2 ถึง 3 ครั้งต่อสัปดาห์
- Post-thaw recovery
- หลังจากละลายน้ำแข็งแล้ว ให้เพาะเซลล์ในจานเพาะเลี้ยงที่ความหนาแน่น 5 x 104 เซลล์ต่อตารางเซนติเมตร และปล่อยให้เซลล์ฟื้นตัวจากกระบวนการแช่แข็งและยึดเกาะกับพื้นผิวเป็นเวลาอย่างน้อย 24 ชั่วโมง
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง
เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน
- Freeze medium
- ในฐานะที่เป็นสารอาหารสำหรับการแช่แข็ง เราใช้สารอาหารสำหรับการเจริญเติบโตแบบครบถ้วน (รวมถึง FBS) + 10% DMSO เพื่อความมีชีวิตหลังการละลายที่เพียงพอ หรือ CM-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 800100) ซึ่งรวมถึงสารป้องกันออสโมติกและสารรักษาเสถียรภาพเมตาบอลิซึมที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อเพิ่มการฟื้นตัวและลดความเครียดที่เกิดจากการแช่แข็ง
- Storage conditions
สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น
- Shipping conditions
เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า
08Donor
- Donor age
- 30 ปี
- Ethnicity
- แอฟริกันอเมริกัน
09Legal and safety
- Safety precautions
- เมื่อวางแผนที่จะเก็บขวดแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวเพื่อการละลายในอนาคต จำเป็นต้องปฏิบัติตามมาตรการความปลอดภัยอย่างเคร่งครัด การสวมถุงมือป้องกันและเสื้อผ้าที่เหมาะสมเป็นสิ่งจำเป็น และต้องใช้หน้ากากหรือแว่นตานิรภัยในระหว่างการถ่ายโอนตัวอย่างแช่แข็งไปยังหรือจากถังไนโตรเจนเหลว ทั้งนี้เพื่อลดความเสี่ยงจากการบาดเจ็บที่อาจเกิดจากการระเบิดของขวดแช่แข็งเมื่อนำออก ซึ่งอาจทำให้เศษแหลมคมกระเด็นออกมาได้
- Warranty
ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์
สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.
- Third-party agreements apply
- Yes
.jpg)
.jpg)
.jpg)
.jpg)
.jpg)
.jpg)
.jpg)