Ga naar de inhoud
HK EGFP-Kleisin-beta
Weefsel
Baarmoederhals
Ziekte
Carcinoom
Synoniemen
HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b, HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP

Documenten

HK EGFP-Kleisin-beta

Cell line · Productnummer 300674

The HK EGFP-Kleisin-beta cell line represents a genetically modified variant of Hela Kyoto cells designed primarily for the study of chromosome cohesion d...

€800.00excl. btw en verzendkosten

Maatwerk / Aanbevelingen

Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De HK EGFP-Kleisin-beta cellijn vertegenwoordigt een genetisch gemodificeerde variant van Hela Kyoto-cellen, voornamelijk ontworpen voor het bestuderen van chromosoomcohesie tijdens de celcyclus. Deze cellijn brengt een versterkt groen fluorescerend eiwit (EGFP) tot expressie dat is samengevoegd met het Kleisin-beta eiwit, een cruciaal onderdeel van het cohesinecomplex dat essentieel is voor de cohesie tussen zustercromatiden. De expressie van EGFP-tagged Kleisin-beta maakt real-time visualisatie mogelijk van cohesinedynamiek en lokalisatie gedurende de celcyclus, waardoor gedetailleerde analyses van chromosoomstructuur en -functie in een cellulaire context mogelijk worden.

Dit celmodel wordt meestal gebruikt in onderzoek dat zich richt op de mechanismen van mitotische en meiotische chromosoomscheiding, waarbij vooral gekeken wordt naar hoe de regulatie van cohesine de genetische stabiliteit en celdeling beïnvloedt. De fluorescerende tagging van Kleisin-beta maakt het mogelijk om de interactie met andere cohesine componenten en chromosomale eiwitten te onderzoeken, wat inzicht geeft in de ruimtelijke en temporele assemblage van cohesine op chromosomen. Het gebruik van deze cellijn strekt zich uit tot studies van genetische aandoeningen en kankers waarbij de cohesinefunctie verstoord is, en biedt een waardevol hulpmiddel om de pathogenese te begrijpen en therapeutische strategieën te ontwikkelen.

Weefsel
Baarmoederhals
Ziekte
Carcinoom
Synoniemen
  • HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b
  • HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Groei-eigenschappen
Aanhanger
GGO-status
GMO-S1
Details over de GGO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-kleisin-beta construct for live-cell studies of cohesin and chromosome architecture. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtige cellen met mozaïeksteenvorm

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
HK EGFP-Kleisin-beta (Cytion catalogusnummer 300674)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_1D64
Inlegger
Het Ellenberg Lab (EMBL)

05Expressie en vatbaarheid

Eiwit-expressie
EGFP-Kleisin-β: Locatie/gen: 1..589 / Pcmv, 619..645 / Flag-tag, 661..1368 / GFP, 1393..3206 / Kleisin Beta, 4474..5268 KanR/NeoR

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat (Cytion artikelnummer 820300a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Zaaidichtheid
1 x 104 cellen/cm2
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Herstel na ontdooiing
Na ontdooien, de cellen op een plaat aanbrengen met een dichtheid van 5 x 104 cellen/cm2 en de cellen minstens 24 uur laten herstellen van het invriesproces en zich hechten.
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
30 jaar
Etnische afkomst
Afro-Amerikaan