Ga naar de inhoud
HK EGFP-Cap-D2
Weefsel
Baarmoederhals
Ziekte
Carcinoom
Synoniemen
HeLa Kyoto EGFP CAP-D2, HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

Documenten

HK EGFP-Cap-D2

Cell line · Productnummer 300675

The HK EGFP-Cap-D2 cell line is an engineered variant of Hela Kyoto cells, specifically designed for advanced research in cellular biology and genetic eng...

€800.00excl. btw en verzendkosten
Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De HK EGFP-Cap-D2 cellijn is een gemanipuleerde variant van Hela Kyoto cellen, speciaal ontworpen voor geavanceerd onderzoek in cellulaire biologie en genetische manipulatie. Deze cellijn brengt versterkt groen fluorescerend eiwit (EGFP) tot expressie dat is versmolten met de C-terminus van de D2 dopaminereceptor, waardoor receptordynamica en -distributie in real-time kunnen worden gevisualiseerd onder fluorescentiemicroscopie. Deze eigenschap is vooral gunstig voor het bestuderen van receptortransport, signaalroutes en de effecten van farmacologische middelen op het gedrag van de D2-receptor.

Deze cellen worden veel gebruikt in neurologisch onderzoek om een beter inzicht te krijgen in de mechanismen die ten grondslag liggen aan dopaminesignalering, die cruciaal is bij veel neurologische aandoeningen zoals de ziekte van Parkinson, schizofrenie en depressie. De fusie van EGFP met de D2-receptor heeft geen invloed op de normale functie van de receptor of zijn cellulaire lokalisatie, waardoor HK EGFP-Cap-D2 een waardevol instrument is voor fysiologische en pathologische studies. De stabiele expressie van EGFP maakt ook longitudinale studies in levende cellen mogelijk, wat inzicht geeft in de dynamische processen van receptorregulatie en interactie met andere cellulaire componenten.

Weefsel
Baarmoederhals
Ziekte
Carcinoom
Synoniemen
  • HeLa Kyoto EGFP CAP-D2
  • HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Groei-eigenschappen
Aanhanger
GGO-status
GMO-S1
Details over de GGO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-Cap-D2 construct enabling live-cell studies of condensin-II dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtige cellen met mozaïeksteenvorm

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
HK EGFP-Cap-D2 (Cytion catalogusnummer 300675)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_1D60
Inlegger
Het Ellenberg Lab (EMBL)

05Expressie en vatbaarheid

Eiwit-expressie
EGFP-CAP-D2, Ongeveer 80% van de cellen vertoont expressie: Locatie/gen: 1..589 / Pcmv, 619..645 / Flag-tag, 646..660, 1375..1389/null, 661..1374 / EGFP, 1435..5638/CAP-D2, 6886..7680/KanR/NeoR
Producten
CMV Promotor, FLAG octapeptide, Glycine linker, Neomycine, Fosfotransferase

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat (Cytion artikelnummer 820300a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Zaaidichtheid
1 x 104 cellen/cm2
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Herstel na ontdooiing
Na ontdooien, de cellen op een plaat aanbrengen met een dichtheid van 5 x 104 cellen/cm2 en de cellen minstens 24 uur laten herstellen van het invriesproces en zich hechten.
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
30 jaar
Etnische afkomst
Afro-Amerikaan