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HK EGFP-Cap-D2
Tecido
Colo do útero
Doença
Carcinoma
Sinónimos
HeLa Kyoto EGFP CAP-D2, HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

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HK EGFP-Cap-D2

Cell line · Número do produto 300675

The HK EGFP-Cap-D2 cell line is an engineered variant of Hela Kyoto cells, specifically designed for advanced research in cellular biology and genetic eng...

€800.00sem impostos nem portes de envio
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01Informações gerais

Descrição

A linha celular HK EGFP-Cap-D2 é uma variante modificada das células Hela Kyoto, especificamente concebida para investigação avançada em biologia celular e engenharia genética. Esta linha celular exprime uma proteína verde fluorescente melhorada (EGFP) fundida com o terminal C do recetor de dopamina D2, permitindo a visualização da dinâmica e distribuição do recetor em tempo real sob microscopia de fluorescência. Esta caraterística é particularmente benéfica para o estudo do tráfico de receptores, das vias de sinalização e dos efeitos de agentes farmacológicos no comportamento do recetor D2.

Estas células são amplamente utilizadas na investigação neurológica para compreender melhor os mecanismos subjacentes à sinalização da dopamina, que é crucial em muitas perturbações neurológicas, como a doença de Parkinson, a esquizofrenia e a depressão. A fusão da EGFP com o recetor D2 não afecta a função normal do recetor nem a sua localização celular, o que faz da HK EGFP-Cap-D2 uma ferramenta valiosa para estudos fisiológicos e patológicos. A expressão estável de EGFP também permite estudos longitudinais em células vivas, fornecendo informações sobre os processos dinâmicos de regulação do recetor e interação com outros componentes celulares.

Tecido
Colo do útero
Doença
Carcinoma
Sinónimos
  • HeLa Kyoto EGFP CAP-D2
  • HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Estatuto em matéria de OGM
GMO-S1
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-Cap-D2 construct enabling live-cell studies of condensin-II dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Células de tipo epitelial com forma de pedra em mosaico

04Identificadores

Referência
HK EGFP-Cap-D2 (número de catálogo Cytion 300675)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1D60
Depositante
O Laboratório Ellenberg (EMBL)

05Expressão e suscetibilidade

Expressão proteica
EGFP-CAP-D2, Cerca de 80% das células apresentam expressão: Localização/Gene: 1..589 / Pcmv, 619..645 / Flag-tag, 646..660, 1375..1389/null, 661..1374 / EGFP, 1435..5638/CAP-D2, 6886..7680/KanR/NeoR
Produtos
Promotor do CMV, octapeptídeo FLAG, ligante de glicina, neomicina, fosfotransferase

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
1 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Após o descongelamento, coloque as células em placas a uma densidade de 5 x 104 células/cm² e deixe-as recuperar do processo de congelamento e aderir durante pelo menos 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
30 anos
Etnia
Afro-americano