Skip to content
HK EGFP-Cap-D2
Tissue
Cổ tử cung
Disease
Ung thư biểu mô
Synonyms
HeLa Kyoto EGFP CAP-D2, HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

Documents

HK EGFP-Cap-D2

Cell line · Product number 300675

The HK EGFP-Cap-D2 cell line is an engineered variant of Hela Kyoto cells, specifically designed for advanced research in cellular biology and genetic eng...

€800.00excl. tax and shipping

Customization / Recommendations

In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
1

01General information

Description

Dòng tế bào HK EGFP-Cap-D2 là một biến thể được công nghệ hóa của dòng tế bào Hela Kyoto, được thiết kế đặc biệt cho các nghiên cứu nâng cao trong sinh học tế bào và công nghệ gen. Dòng tế bào này biểu hiện protein huỳnh quang xanh lá cây tăng cường (EGFP) được gắn vào đầu C-terminus của thụ thể dopamine D2, cho phép quan sát động học và phân bố của thụ thể trong thời gian thực dưới kính hiển vi huỳnh quang. Tính năng này đặc biệt hữu ích cho việc nghiên cứu quá trình vận chuyển thụ thể, các con đường tín hiệu và tác động của các chất dược lý lên hành vi của thụ thể D2.

Các tế bào này được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu thần kinh để hiểu rõ hơn về các cơ chế cơ bản của tín hiệu dopamine, điều này rất quan trọng trong nhiều rối loạn thần kinh như bệnh Parkinson, tâm thần phân liệt và trầm cảm. Việc gắn EGFP vào thụ thể D2 không ảnh hưởng đến chức năng bình thường của thụ thể hoặc vị trí tế bào của nó, khiến HK EGFP-Cap-D2 trở thành công cụ quý giá cho các nghiên cứu sinh lý và bệnh lý. Sự biểu hiện ổn định của EGFP cũng cho phép thực hiện các nghiên cứu theo dõi dài hạn trên tế bào sống, cung cấp cái nhìn sâu sắc về các quá trình động học của điều hòa thụ thể và tương tác với các thành phần tế bào khác.

Tissue
Cổ tử cung
Disease
Ung thư biểu mô
Synonyms
  • HeLa Kyoto EGFP CAP-D2
  • HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-Cap-D2 construct enabling live-cell studies of condensin-II dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
Tế bào có hình dạng giống biểu mô với cấu trúc dạng đá mozaic

04Identifiers

Citation
HK EGFP-Cap-D2 (Số catalog của Cytion: 300675)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_1D60
Depositor
Phòng thí nghiệm Ellenberg (EMBL)

05Expression and susceptibility

Protein expression
EGFP-CAP-D2, Khoảng 80% tế bào biểu hiện: Vị trí/Gen: 1..589 / Pcmv, 619..645 / Flag-tag, 646..660, 1375..1389/null, 661..1374 / EGFP, 1435..5638/CAP-D2, 6886..7680/KanR/NeoR
Products
CMV Promotor, FLAG octapeptide, Glycin linker, Neomycin, Phosphotransferase

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, chứa: 4,5 g/L glucose, chứa: 4 mM L-glutamine, chứa: 3,7 g/L NaHCO₃, chứa: 1,0 mM natri pyruvate (số hiệu sản phẩm Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO₂, môi trường ẩm.

Supplements
Bổ sung 10% huyết thanh bò phôi (FBS) vào môi trường nuôi cấy
Dissociation reagent
Accutase
Subculturing
Loại bỏ môi trường nuôi cấy cũ khỏi các tế bào bám dính và rửa chúng bằng PBS không chứa canxi và magiê. Đối với bình T25, sử dụng 3-5 ml PBS, và đối với bình T75, sử dụng 5-10 ml. Sau đó, phủ hoàn toàn các tế bào bằng Accutase, sử dụng 1-2 ml cho bình T25 và 2,5 ml cho bình T75. Để tế bào ủ ở nhiệt độ phòng trong 8-10 phút để tách chúng ra. Sau khi ủ, nhẹ nhàng trộn tế bào với 10 ml môi trường để tái phân tán chúng, sau đó ly tâm ở 300xg trong 3 phút. Loại bỏ dịch trên, tái phân tán tế bào trong môi trường tươi và chuyển chúng vào các bình mới đã chứa môi trường tươi.
Seeding density
1 × 10⁴ tế bào/cm²
Fluid renewal
2 đến 3 lần mỗi tuần
Post-thaw recovery
Sau khi rã đông, cấy tế bào với mật độ 5 x 10⁴ tế bào/cm² và để tế bào phục hồi sau quá trình đông lạnh và bám dính ít nhất 24 giờ.
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

Sự nhiễm khuẩn Mycoplasma được loại trừ bằng cả các phương pháp xét nghiệm dựa trên PCR và các phương pháp phát hiện Mycoplasma dựa trên phát quang.

Để đảm bảo không có nhiễm khuẩn vi khuẩn, nấm hoặc men, các mẫu nuôi cấy tế bào được kiểm tra trực quan hàng ngày.

Freeze medium
Như một môi trường bảo quản đông lạnh, chúng tôi sử dụng môi trường tăng trưởng hoàn chỉnh (bao gồm FBS) + 10% DMSO để đảm bảo độ sống sau khi rã đông, hoặc CM-1 (mã sản phẩm Cytion 800100), bao gồm các chất bảo vệ thẩm thấu và chất ổn định chuyển hóa được tối ưu hóa để cải thiện quá trình phục hồi và giảm stress do đông lạnh gây ra.
Storage conditions

Để bảo quản lâu dài, hãy đặt ống nghiệm vào nitơ lỏng ở pha hơi ở nhiệt độ khoảng −150 đến −196 °C. Việc bảo quản ở −80 °C chỉ được chấp nhận như một bước trung gian ngắn hạn trước khi chuyển sang nitơ lỏng.

Shipping conditions

Các dòng tế bào được bảo quản bằng phương pháp đông lạnh được vận chuyển trên đá khô trong bao bì cách nhiệt đã được kiểm định, kèm theo lượng chất làm lạnh đủ để duy trì nhiệt độ khoảng −78 °C trong suốt quá trình vận chuyển. Khi nhận hàng, hãy kiểm tra ngay lập tức bao bì và chuyển các ống nghiệm sang nơi lưu trữ phù hợp mà không chậm trễ.

08Donor

Donor age
30 năm
Ethnicity
Người Mỹ gốc Phi