Μετάβαση στο περιεχόμενο
HK EGFP-Cap-D2
Ιστός
Τράχηλος μήτρας
Ασθένεια
Καρκίνωμα
Συνώνυμα
HeLa Kyoto EGFP CAP-D2, HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

Έγγραφα

HK EGFP-Cap-D2

Cell line · Αριθμός προϊόντος 300675

The HK EGFP-Cap-D2 cell line is an engineered variant of Hela Kyoto cells, specifically designed for advanced research in cellular biology and genetic eng...

€800.00χωρίς ΦΠΑ και έξοδα αποστολής

Προσαρμογή / Προτάσεις

Σε απόθεμα
Lot
Συνιστάται (η πιο φρέσκια παρτίδα)
1

01Γενικές πληροφορίες

Περιγραφή

Η κυτταρική σειρά HK EGFP-Cap-D2 είναι μια τροποποιημένη παραλλαγή των κυττάρων Hela Kyoto, ειδικά σχεδιασμένη για προηγμένη έρευνα στην κυτταρική βιολογία και τη γενετική μηχανική. Αυτή η κυτταρική σειρά εκφράζει ενισχυμένη πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη (EGFP) συντηγμένη με το C-τελικό άκρο του υποδοχέα της ντοπαμίνης D2, επιτρέποντας την απεικόνιση της δυναμικής και της κατανομής του υποδοχέα σε πραγματικό χρόνο υπό μικροσκοπία φθορισμού. Αυτό το χαρακτηριστικό είναι ιδιαίτερα επωφελές για τη μελέτη της διακίνησης του υποδοχέα, των μονοπατιών σηματοδότησης και των επιδράσεων των φαρμακολογικών παραγόντων στη συμπεριφορά του υποδοχέα D2.

Τα κύτταρα αυτά χρησιμοποιούνται εκτενώς στη νευρολογική έρευνα για την καλύτερη κατανόηση των μηχανισμών που διέπουν τη σηματοδότηση της ντοπαμίνης, η οποία είναι ζωτικής σημασίας σε πολλές νευρολογικές διαταραχές, όπως η νόσος του Πάρκινσον, η σχιζοφρένεια και η κατάθλιψη. Η σύντηξη του EGFP στον υποδοχέα D2 δεν επηρεάζει τη φυσιολογική λειτουργία του υποδοχέα ή τον κυτταρικό εντοπισμό του, καθιστώντας το HK EGFP-Cap-D2 ένα πολύτιμο εργαλείο για φυσιολογικές και παθολογικές μελέτες. Η σταθερή έκφραση του EGFP επιτρέπει επίσης διαχρονικές μελέτες σε ζωντανά κύτταρα, παρέχοντας πληροφορίες για τις δυναμικές διαδικασίες ρύθμισης του υποδοχέα και την αλληλεπίδραση με άλλα κυτταρικά συστατικά.

Ιστός
Τράχηλος μήτρας
Ασθένεια
Καρκίνωμα
Συνώνυμα
  • HeLa Kyoto EGFP CAP-D2
  • HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

02Ταξινόμηση

Οργανισμός
Άνθρωπος
Σεξ
Γυναίκα
Ιδιότητες ανάπτυξης
Πιστός
Κατάσταση όσον αφορά τους ΓΤΟ
GMO-S1
Λεπτομέρειες σχετικά με την κατάσταση των ΓΤΟ
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-Cap-D2 construct enabling live-cell studies of condensin-II dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Επίπεδο βιοασφάλειας
1

03Χαρακτηριστικά

Μορφολογία
Επιθηλιακά κύτταρα με ψηφιδωτό σχήμα πέτρας

04Αναγνωριστικά

Παραπομπή
HK EGFP-Cap-D2 (αριθμός καταλόγου Cytion 300675)
Αριθμός φορολογικού μητρώου NCBI
9606
Κελλοσαύρος
CVCL_1D60
Καταθέτης
Εργαστήριο Ellenberg (EMBL)

05Έκφραση και ευαισθησία

Έκφραση πρωτεϊνών
EGFP-CAP-D2, Περίπου το 80% των κυττάρων εμφανίζουν έκφραση: 1..589 / Pcmv, 619..645 / Flag-tag, 646..660, 1375..1389/null, 661..1374 / EGFP, 1435..5638/CAP-D2, 6886..7680/KanR/NeoR
Προϊόντα
CMV Promotor, οκταπεπτίδιο FLAG, σύνδεσμος γλυκίνης, νεομυκίνη, φωσφοτρανσφεράση

06Χειρισμός και καλλιέργεια

Θρεπτικό μέσο
DMEM, w: 4,5 g/L γλυκόζη, w: 4 mM L-γλουταμίνη, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM πυρουβικό νάτριο (αριθμός άρθρου Cytion 820300a)
Ατμόσφαιρα επώασης

37°C, 5%CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

Συμπληρώματα
Συμπληρώστε το μέσο με 10% FBS
Αντιδραστήριο αποσύνδεσης
Accutase
Αναπαραγωγή σε υποκαλλιέργεια
Αφαιρέστε το παλιό μέσο από τα προσκολλημένα κύτταρα και πλύντε τα με PBS που δεν περιέχει ασβέστιο και μαγνήσιο. Για φιάλες T25, χρησιμοποιήστε 3-5 ml PBS και για φιάλες T75, χρησιμοποιήστε 5-10 ml. Στη συνέχεια, καλύψτε πλήρως τα κύτταρα με Accutase, χρησιμοποιώντας 1-2 ml για φιάλες T25 και 2,5 ml για φιάλες T75. Αφήστε τα κύτταρα να επωαστούν σε θερμοκρασία δωματίου για 8-10 λεπτά για να αποκολληθούν. Μετά την επώαση, αναμείξτε απαλά τα κύτταρα με 10 ml μέσου για να ανασυσταθούν και, στη συνέχεια, φυγοκεντρίστε στα 300xg για 3 λεπτά. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό, ανασυστάστε τα κύτταρα σε φρέσκο μέσο και μεταφέρετέ τα σε νέες φιάλες που περιέχουν ήδη φρέσκο μέσο.
Πυκνότητα σποράς
1 x 104 κύτταρα/cm2
Ανανέωση υγρών
2 έως 3 φορές την εβδομάδα
Ανάκαμψη μετά την απόψυξη
Μετά την απόψυξη, τοποθετήστε τα κύτταρα σε πλάκα με πυκνότητα 5 x 104 κύτταρα/cm2 και αφήστε τα κύτταρα να αναρρώσουν από τη διαδικασία κατάψυξης και να προσκολληθούν για τουλάχιστον 24 ώρες.
Απόψυξη και καλλιέργεια
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Έλεγχος ποιότητας και κρυοσυντήρηση

Στειρότητα

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Μέσο κατάψυξης
Ως μέσο κρυοσυντήρησης, χρησιμοποιούμε πλήρες μέσο ανάπτυξης (συμπεριλαμβανομένου του FBS) + 10% DMSO για επαρκή βιωσιμότητα μετά την απόψυξη, ή CM-1 (αριθμός καταλόγου Cytion 800100), το οποίο περιλαμβάνει βελτιστοποιημένα ωσμοπροστατευτικά και μεταβολικούς σταθεροποιητές για την ενίσχυση της ανάκαμψης και τη μείωση του στρες που προκαλείται από την κρυοσυντήρηση.
Συνθήκες αποθήκευσης

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Όροι αποστολής

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

08Δωρητής

Ηλικία δωρητή
30 χρόνια
Εθνικότητα
Αφροαμερικανός