Μετάβαση στο περιεχόμενο
HK EGFP-H2B
Ιστός
Τράχηλος μήτρας
Ασθένεια
Καρκίνωμα
Συνώνυμα
HeLa Kyoto H2B-EGFP, HeLa Kyoto H2B EGFP, HeLa-H2B-GFP

Έγγραφα

HK EGFP-H2B

Cell line · Αριθμός προϊόντος 300673

The HK EGFP-H2B cell line is a genetically modified Hela Kyoto cell line used primarily for the study of chromatin dynamics and nuclear processes. This ce...

€800.00χωρίς ΦΠΑ και έξοδα αποστολής

Προσαρμογή / Προτάσεις

Χαμηλά αποθέματα
Lot
Συνιστάται (η πιο φρέσκια παρτίδα)
1

01Γενικές πληροφορίες

Περιγραφή

Η κυτταρική σειρά HK EGFP-H2B είναι μια γενετικά τροποποιημένη κυτταρική σειρά Hela Kyoto που χρησιμοποιείται κυρίως για τη μελέτη της δυναμικής της χρωματίνης και των πυρηνικών διεργασιών. Αυτή η κυτταρική σειρά εκφράζει μια πρωτεΐνη σύντηξης που αποτελείται από ενισχυμένη πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη (EGFP) και ιστόνη H2B. Η ενσωμάτωση της EGFP στην πρωτεΐνη H2B επιτρέπει την απεικόνιση σε πραγματικό χρόνο της χρωματίνης σε ζωντανά κύτταρα με μικροσκοπία φθορισμού, παρέχοντας πολύτιμες πληροφορίες για τη χωρική και χρονική οργάνωση του πυρήνα.

Η σύντηξη EGFP-H2B διευκολύνει πολυάριθμες εφαρμογές στην κυτταρική βιολογία, συμπεριλαμβανομένης της μελέτης της εξέλιξης του κυτταρικού κύκλου, της μίτωσης και της ρύθμισης της γονιδιακής έκφρασης. Παρατηρώντας τα μοτίβα φθορισμού, οι ερευνητές μπορούν να προσδιορίσουν και να αναλύσουν τις φάσεις του κυτταρικού κύκλου, τον χρωμοσωμικό διαχωρισμό και τις δομικές αλλαγές εντός του πυρήνα. Αυτή η κυτταρική σειρά προέρχεται από ενήλικα ανθρώπινα κύτταρα, εξασφαλίζοντας τη συνάφεια με την ανθρώπινη βιολογία, και χρησιμοποιείται τόσο στη βασική βιολογική έρευνα όσο και σε πιο εφαρμοσμένες φαρμακευτικές μελέτες.

Επιπλέον, η κυτταρική σειρά HK EGFP-H2B χρησιμεύει ως κρίσιμο εργαλείο στην έρευνα επιγενετικής. Η δυνατότητα άμεσης παρατήρησης της συμπεριφοράς των ιστονών βοηθά στην κατανόηση των επιγενετικών μηχανισμών που διέπουν την έκφραση και την αποσιώπηση των γονιδίων, καθώς και των επιδράσεων των διαφόρων επιγενετικών τροποποιητών. Η ισχυρή εφαρμογή της κυτταρικής σειράς σε πειράματα απεικόνισης ζωντανών κυττάρων την καθιστά απαραίτητη για λεπτομερείς μελέτες που απαιτούν δυναμική κυτταρική ανάλυση.

Ιστός
Τράχηλος μήτρας
Ασθένεια
Καρκίνωμα
Συνώνυμα
  • HeLa Kyoto H2B-EGFP
  • HeLa Kyoto H2B EGFP
  • HeLa-H2B-GFP

02Ταξινόμηση

Οργανισμός
Άνθρωπος
Σεξ
Γυναίκα
Ιδιότητες ανάπτυξης
Πιστός
Κατάσταση όσον αφορά τους ΓΤΟ
GMO-S1
Λεπτομέρειες σχετικά με την κατάσταση των ΓΤΟ
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-H2B construct allowing real-time visualization of chromatin organization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Επίπεδο βιοασφάλειας
1

03Χαρακτηριστικά

Μορφολογία
Επιθηλιακά κύτταρα με ψηφιδωτό σχήμα πέτρας

04Αναγνωριστικά

Παραπομπή
HK EGFP-H2B (αριθμός καταλόγου Cytion 300673)
Αριθμός φορολογικού μητρώου NCBI
9606
Κελλοσαύρος
CVCL_1D63
Καταθέτης
Εργαστήριο Ellenberg (EMBL)

05Έκφραση και ευαισθησία

Έκφραση πρωτεϊνών
EGFP-H2B: Θέση/γονίδιο: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Προϊόντα
CMV Promotor, ιστόνη H2B, νεομυκίνη, φωσφοτρανσφεράση

06Χειρισμός και καλλιέργεια

Θρεπτικό μέσο
DMEM, w: 4,5 g/L γλυκόζη, w: 4 mM L-γλουταμίνη, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM πυρουβικό νάτριο (αριθμός άρθρου Cytion 820300a)
Ατμόσφαιρα επώασης

37°C, 5%CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

Συμπληρώματα
Συμπληρώστε το μέσο με 10% FBS
Αντιδραστήριο αποσύνδεσης
Accutase
Αναπαραγωγή σε υποκαλλιέργεια
Αφαιρέστε το παλιό μέσο από τα προσκολλημένα κύτταρα και πλύντε τα με PBS που δεν περιέχει ασβέστιο και μαγνήσιο. Για φιάλες T25, χρησιμοποιήστε 3-5 ml PBS και για φιάλες T75, χρησιμοποιήστε 5-10 ml. Στη συνέχεια, καλύψτε πλήρως τα κύτταρα με Accutase, χρησιμοποιώντας 1-2 ml για φιάλες T25 και 2,5 ml για φιάλες T75. Αφήστε τα κύτταρα να επωαστούν σε θερμοκρασία δωματίου για 8-10 λεπτά για να αποκολληθούν. Μετά την επώαση, αναμείξτε απαλά τα κύτταρα με 10 ml μέσου για να ανασυσταθούν και, στη συνέχεια, φυγοκεντρίστε στα 300xg για 3 λεπτά. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό, ανασυστάστε τα κύτταρα σε φρέσκο μέσο και μεταφέρετέ τα σε νέες φιάλες που περιέχουν ήδη φρέσκο μέσο.
Πυκνότητα σποράς
1 x 104 κύτταρα/cm2
Ανανέωση υγρών
2 έως 3 φορές την εβδομάδα
Ανάκαμψη μετά την απόψυξη
Μετά την απόψυξη, τοποθετήστε τα κύτταρα σε πλάκα με πυκνότητα 5 x 104 κύτταρα/cm2 και αφήστε τα κύτταρα να αναρρώσουν από τη διαδικασία κατάψυξης και να προσκολληθούν για τουλάχιστον 24 ώρες.
Απόψυξη και καλλιέργεια
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Έλεγχος ποιότητας και κρυοσυντήρηση

Στειρότητα

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Μέσο κατάψυξης
Ως μέσο κρυοσυντήρησης, χρησιμοποιούμε πλήρες μέσο ανάπτυξης (συμπεριλαμβανομένου του FBS) + 10% DMSO για επαρκή βιωσιμότητα μετά την απόψυξη, ή CM-1 (αριθμός καταλόγου Cytion 800100), το οποίο περιλαμβάνει βελτιστοποιημένα ωσμοπροστατευτικά και μεταβολικούς σταθεροποιητές για την ενίσχυση της ανάκαμψης και τη μείωση του στρες που προκαλείται από την κρυοσυντήρηση.
Συνθήκες αποθήκευσης

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Όροι αποστολής

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

08Δωρητής

Ηλικία δωρητή
30 χρόνια
Εθνικότητα
Αφροαμερικανός