Pereiti prie turinio
HK EGFP-H2B
Audinys
Gimdos kaklelis
Liga
Karcinoma
Sinonimai
HeLa Kyoto H2B-EGFP, HeLa Kyoto H2B EGFP, HeLa-H2B-GFP

Dokumentai

HK EGFP-H2B

Cell line · Prekės numeris 300673

The HK EGFP-H2B cell line is a genetically modified Hela Kyoto cell line used primarily for the study of chromatin dynamics and nuclear processes. This ce...

€800.00neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų
Mažos atsargos
Lot
Rekomenduojama (šviežiausia partija)
1

01Bendra informacija

Aprašymas

HK EGFP-H2B ląstelių linija yra genetiškai modifikuota Hela Kyoto ląstelių linija, daugiausia naudojama chromatino dinamikai ir branduolio procesams tirti. Ši ląstelių linija išreiškia sintezės baltymą, sudarytą iš sustiprinto žaliojo fluorescencinio baltymo (EGFP) ir histono H2B. Integravus EGFP į H2B baltymą, chromatiną gyvosiose ląstelėse galima vizualizuoti realiuoju laiku fluorescenciniu mikroskopu ir taip gauti vertingų įžvalgų apie branduolio erdvinę ir laikinę organizaciją.

EGFP-H2B sintezė palengvina daugelį ląstelių biologijos taikymų, įskaitant ląstelių ciklo eigos, mitozės ir genų raiškos reguliavimo tyrimus. Stebėdami fluorescencijos modelius, mokslininkai gali nustatyti ir analizuoti ląstelių ciklo fazes, chromosomų segregaciją ir struktūrinius pokyčius branduolyje. Ši ląstelių linija yra išvesta iš suaugusio žmogaus ląstelių, todėl yra svarbi žmogaus biologijai ir naudojama tiek fundamentiniams biologiniams tyrimams, tiek taikomiesiems farmaciniams tyrimams.

Be to, HK EGFP-H2B ląstelių linija yra labai svarbi epigenetikos tyrimų priemonė. Galimybė tiesiogiai stebėti histonų elgseną padeda suprasti epigenetinius mechanizmus, kuriais grindžiama genų raiška ir slopinimas, taip pat įvairių epigenetinių modifikatorių poveikį. Ląstelių linija, kurią galima plačiai taikyti atliekant gyvų ląstelių vaizdavimo eksperimentus, yra nepakeičiama atliekant išsamius tyrimus, reikalaujančius dinamiškos ląstelių analizės.

Audinys
Gimdos kaklelis
Liga
Karcinoma
Sinonimai
  • HeLa Kyoto H2B-EGFP
  • HeLa Kyoto H2B EGFP
  • HeLa-H2B-GFP

02Klasifikacija

Organizmas
Žmogus
Seksas
Moteris
Augimo savybės
Prisijungęs
GMO statusas
GMO-S1
Išsami informacija apie GMO statusą
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-H2B construct allowing real-time visualization of chromatin organization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologinio saugumo lygis
1

03Charakteristikos

Morfologija
Į epitelį panašios ląstelės su mozaikos formos akmenukais

04Identifikatoriai

Nuoroda
HK EGFP-H2B (Cytion katalogo numeris 300673)
NCBI mokesčių identifikavimo kodas
9606
Cellosaurus
CVCL_1D63
Indėlininkas
Ellenbergo laboratorija (EMBL)

05Išraiška ir jautrumas

Baltojų baltymų ekspresija
EGFP-H2B: Vieta/genas: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produktai
CMV Promotor, Histonas H2B, Neomicinas, Fosfotransferazė

06Laikymas ir auginimas

Maitinamoji terpė
DMEM, š: 4,5 g/l gliukozės, š: 4 mM L-glutamino, š: 3,7 g/l NaHCO3, š: 1,0 mM natrio piruvato (Cytion gaminio numeris 820300a)
Inkubacijos aplinka

37 °C, 5 %CO2, drėkintoje atmosferoje.

Maisto papildai
Papildykite terpę 10 % FBS
Disociacijos reagentas
Accutase
Subkultūrinis auginimas
Pašalinkite seną terpę nuo prilipusių ląstelių ir nuplaukite jas PBS, kuriame nėra kalcio ir magnio. T25 kolboms naudokite 3-5 ml PBS, o T75 kolboms - 5-10 ml. Tuomet visiškai užpilkite ląsteles "Accutase", naudodami 1-2 ml T25 kolboms ir 2,5 ml T75 kolboms. Leiskite ląstelėms inkubuotis kambario temperatūroje 8-10 minučių, kad jos atsiskirtų. Po inkubacijos atsargiai sumaišykite ląsteles su 10 ml terpės, kad jos vėl suspenduotų, tada 3 minutes centrifuguokite 300xg greičiu. Išmeskite supernatantą, vėl sutirpinkite ląsteles šviežioje terpėje ir perkelkite jas į naujas kolbas, kuriose jau yra šviežia terpė.
Sėjos tankis
1 x 104 ląstelės/cm2
Skysčių atnaujinimas
2-3 kartus per savaitę
Atkūrimas po atšilimo
Atšildžius, išdėliokite ląsteles 5 x 104 ląstelių/cm2 tankumu ir leiskite ląstelėms atsigauti po užšaldymo proceso ir prisitvirtinti bent 24 valandas.
Atšildymas ir auginimas
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kokybės kontrolė ir kriokonservavimas

Sterilumas

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Šaldymo terpė
Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas.
Laikymo sąlygos

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Pristatymo sąlygos

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

08Donoras

Donoro amžius
30 metų
Etninė priklausomybė
Afroamerikietis