Gå direkte til indholdet
HK EGFP-H2B
Væv
Livmoderhalsen
Sygdom
Karcinom
Synonymer
HeLa Kyoto H2B-EGFP, HeLa Kyoto H2B EGFP, HeLa-H2B-GFP

Dokumenter

HK EGFP-H2B

Cell line · Varenummer 300673

The HK EGFP-H2B cell line is a genetically modified Hela Kyoto cell line used primarily for the study of chromatin dynamics and nuclear processes. This ce...

€800.00ekskl. moms og fragt
Begrænset lagerbeholdning
Lot
Anbefalet (det nyeste parti)
1

01Generelle oplysninger

Beskrivelse

HK EGFP-H2B-cellelinjen er en genetisk modificeret Hela Kyoto-cellelinje, der primært anvendes til undersøgelse af kromatin-dynamik og nukleare processer. Denne cellelinje udtrykker et fusionsprotein bestående af Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) og histon H2B. Integrationen af EGFP i H2B-proteinet giver mulighed for realtidsvisualisering af kromatin i levende celler under fluorescensmikroskopi, hvilket giver værdifuld indsigt i den rumlige og tidsmæssige organisering af kernen.

EGFP-H2B-fusionen muliggør mange anvendelser inden for cellebiologi, herunder undersøgelse af cellecyklusprogression, mitose og regulering af genekspression. Ved at observere fluorescensmønstrene kan forskere identificere og analysere faser i cellecyklussen, kromosomopdeling og strukturelle ændringer i kernen. Denne cellelinje stammer fra voksne menneskeceller, hvilket sikrer relevans for den menneskelige biologi, og den bruges både i biologisk grundforskning og i mere anvendte farmaceutiske undersøgelser.

Derudover fungerer HK EGFP-H2B-cellelinjen som et afgørende værktøj i epigenetisk forskning. Evnen til direkte at observere histonadfærd hjælper med at forstå de epigenetiske mekanismer, der ligger til grund for genekspression og -dæmpning, samt virkningerne af forskellige epigenetiske modifikatorer. Cellelinjens robuste anvendelse i live-celle billeddannelseseksperimenter gør den uundværlig til detaljerede undersøgelser, der kræver dynamisk cellulær analyse.

Væv
Livmoderhalsen
Sygdom
Karcinom
Synonymer
  • HeLa Kyoto H2B-EGFP
  • HeLa Kyoto H2B EGFP
  • HeLa-H2B-GFP

02Klassificering

Organisme
Menneske
Køn
Kvinde
Vækstegenskaber
Tilhænger
GMO-status
GMO-S1
Oplysninger om GMO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-H2B construct allowing real-time visualization of chromatin organization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosikkerhedsniveau
1

03Egenskaber

Morfologi
Epithel-lignende celler med mosaikstenform

04Identifikatorer

Kildehenvisning
HK EGFP-H2B (Cytion katalognummer 300673)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_1D63
Indskyder
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Udtryk og modtagelighed

Proteinekspression
EGFP-H2B: Placering/gen: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produkter
CMV-promotor, histon H2B, neomycin, fosfotransferase

06Håndtering og opdræt

Næringsmedium
DMEM, w: 4,5 g/L glukose, w: 4 mM L-glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosfære

37°C, 5%CO2, befugtet atmosfære.

Kosttilskud
Suppler mediet med 10% FBS
Dissociationsreagens
Accutase
Oddyrkning
Fjern det gamle medium fra de klæbende celler, og vask dem med PBS, der ikke indeholder calcium og magnesium. Brug 3-5 ml PBS til T25-kolber og 5-10 ml til T75-kolber. Dæk derefter cellerne helt med Accutase, brug 1-2 ml til T25-kolber og 2,5 ml til T75-kolber. Lad cellerne inkubere ved stuetemperatur i 8-10 minutter for at løsne dem. Efter inkubationen blandes cellerne forsigtigt med 10 ml medium for at resuspendere dem, og centrifugeres derefter ved 300xg i 3 minutter. Kassér supernatanten, resuspender cellerne i frisk medium, og overfør dem til nye kolber, der allerede indeholder frisk medium.
Såtæthed
1 x 104 celler/cm2
Væskeudskiftning
2 til 3 gange om ugen
Genopretning efter optøning
Efter optøning skal cellerne udplades med 5 x 104 celler/cm2, og cellerne skal have lov til at komme sig efter frysningsprocessen og hæfte sig fast i mindst 24 timer.
Optøning og dyrkning
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontrol og kryopræservering

Sterilitet

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

Frysemedium
Som kryopræserveringsmedium bruger vi komplet vækstmedium (inklusive FBS) + 10 % DMSO for tilstrækkelig levedygtighed efter optøning eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som indeholder optimerede osmobeskyttende stoffer og metaboliske stabilisatorer for at forbedre genopretningen og reducere kryo-induceret stress.
Opbevaringsbetingelser

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Leveringsbetingelser

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

08Donor

Donorens alder
30 år
Etnisk tilhørsforhold
Afroamerikaner